CDK9抑制剂通过诱导转录-复制冲突和DNA损伤积累抑制乳腺癌生长

本研究揭示了CDK9抑制剂AZD4573在乳腺癌治疗中的新机制：通过诱导转录-复制冲突（T-R冲突）和DNA损伤，触发caspase-3依赖性凋亡。韩国首尔国立大学团队发现DDX25解旋酶的核转位是决定药物敏感性的关键因素，为乳腺癌靶向治疗提供了新策略。

在乳腺癌治疗领域，肿瘤异质性和耐药性仍是重大挑战。尽管靶向治疗取得进展，但寻找新靶点迫在眉睫。CDK9作为转录延伸的关键调控因子，在血液肿瘤中已有研究，但其在实体瘤特别是乳腺癌中的作用机制尚不明确。首尔国立大学癌症研究所的Minyoung Lee和Seock-Ah Im团队发现，CDK9抑制剂AZD4573能通过独特机制诱导乳腺癌细胞死亡——不同于已知的MCL1下调途径，而是通过引发转录机器与复制叉的"交通堵塞"，导致基因组灾难性损伤。这项发表于《Cancer Cell International》的研究，为克服乳腺癌治疗耐药提供了全新视角。

研究人员采用MTT法检测细胞活力，Western blot分析信号分子，免疫荧光观察T-R冲突（S9.6抗体标记），EdU掺入实验追踪复制应激，彗星实验检测DNA断裂，并通过siRNA敲除验证机制。使用患者来源异种移植（PDX）模型进行体内验证。

AZD4573的细胞毒性不依赖CDK9或MCL1表达
在21种乳腺癌细胞系中，AZD4573的IC₅₀值差异显著（9.16->100 nmol/L）。值得注意的是，敏感性与CDK9表达水平无相关性（R=0.12），且仅部分敏感细胞出现MCL1下调，提示存在新机制。

AZD4573在S期诱导持续性T-R冲突
敏感细胞（如SK-BR-3）用药10分钟后S9.6阳性灶增加3.5倍，且持续3小时；而耐药细胞（如T47D）30分钟内即恢复。共聚焦显微镜显示，EdU阳性细胞的γ-H2AX焦点增加4.8倍，伴随S期比例下降（p<0.01），证实复制叉停滞导致DNA损伤。

DNA损伤累积引发caspase-3依赖性凋亡
48小时处理后，敏感细胞中γ-H2AX和p-CHK1(ser³⁴⁵)表达升高，彗星尾矩增加9.5倍（p<0.001）。凋亡检测显示亚G1群体增长12.4倍，cleaved PARP和caspase-3水平上升，且可被Z-VAD-FMK（泛caspase抑制剂）阻断。

DDX25核转位决定药物敏感性
全转录组测序（WTS）发现耐药细胞高表达DDX25（p<0.05）。免疫共沉淀证实DDX25直接结合R-loop，其核转位在耐药细胞中增强3倍。siRNA敲除DDX25后，T47D细胞的S9.6阳性灶持续时间延长2.7倍（p<0.01）。

体内实验验证治疗潜力
ZR-75-1移植瘤模型显示，AZD4573（15 mg/kg）使肿瘤生长抑制67%，Ki-67阳性率降低46%（p<0.05），且S9.6阳性细胞增加但DDX25核定位无变化。

该研究首次阐明CDK9抑制剂通过T-R冲突-基因组不稳定-凋亡轴杀伤乳腺癌细胞，并发现DDX25是决定疗效的关键调节因子。这不仅为AZD4573的临床应用提供生物标志物（DDX25核定位检测），更启示了CDK9抑制剂与PARP抑制剂联用的潜在价值——预实验已观察到AZD4573可下调BRCA1表达（图S4），可能产生"合成致死"效应。这项发现为克服乳腺癌治疗耐药开辟了新途径，对实体瘤靶向治疗策略具有重要指导意义。