新型双价重组腺病毒载体疫苗Ad5-WNV-CHIKV在小鼠模型中诱导针对西尼罗病毒和基孔肯雅病毒的强效体液与细胞免疫应答

本研究针对西尼罗病毒(WNV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)这两种蚊媒传播的病原体，开发了一种基于人5型腺病毒(Ad5)载体的双价疫苗Ad5-WNV-CHIKV。该疫苗通过编码WNV prM-E复合物和CHIKV E3-E2-6K-E1抗原，在小鼠模型中单次接种即可诱导高水平中和抗体（WNV-SRIP中和效价IC50达1:1990，CHIKV PRNT效价1:70）及多功能CD4+/CD8+ T细胞应答，为同时防控两种重要虫媒传染病提供了创新解决方案。

　　

蚊媒传播的西尼罗病毒(WNV)和基孔肯雅病毒(CHIKV)近年来因气候变化和全球化加速呈现扩散趋势。WNV可引发致命性脑炎，而CHIKV则导致慢性关节炎，二者均被WHO列为重点防控病原体。尽管已有针对单一病毒的疫苗进入临床试验，但尚无能同时预防两种疾病的方案。中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家传染病智能追踪与预警重点实验室的研究团队在《Virology Journal》发表创新成果，通过构建表达WNV prM-E和CHIKV E3-E2-6K-E1的双价重组腺病毒疫苗Ad5-WNV-CHIKV，成功实现"一苗防两病"的目标。

研究采用分子克隆技术将优化后的WNV（XJ11129-3株）和CHIKV（181/clone25株）抗原基因串联插入Ad5载体，通过Western blot和免疫荧光验证蛋白表达。使用C57BL/6小鼠模型，分低剂量(2×10⁸ vp)和高剂量(1×10⁹ vp)组评估免疫原性，通过ELISA、假病毒中和试验(WNV-SRIP)和噬斑减少中和试验(PRNT)检测体液免疫，采用ELISpot和细胞内细胞因子染色(ICS)分析细胞免疫。

主要结果

1. 抗原表达验证：免疫荧光显示疫苗感染的293细胞中WNV-E和CHIKV-E2蛋白特异性荧光信号，Western blot检测到预期大小的prM-E(WNV)和E1/E2(CHIKV)条带。
2. 剂量依赖性体液免疫：高剂量组诱导的WNV-E-DIII特异性IgG滴度(GMT 1:4050)显著高于低剂量组(1:150)，CHIKV-E2抗体滴度达1:21,044。中和抗体效价呈现相同趋势（WNV IC₅₀ 1:1990 vs 1:724；CHIKV PRNT₅₀ 1:70 vs 1:25）。
3. Th1型细胞免疫优势：ELISpot显示高剂量组WNV-E肽段刺激产生734 SFU/10⁶脾细胞的IFN-γ分泌，ICS证实CD8⁺ T细胞主要分泌IFN-γ和TNF-α，而IL-4分泌量低。

这项研究首次证明单剂Ad5载体双价疫苗可同时诱导针对WNV和CHIKV的平衡免疫应答。其重要意义在于：①突破传统单价疫苗局限，通过2A肽串联表达实现多抗原协同免疫；②Ad5载体固有的强免疫原性使单剂接种即可达到DNA疫苗多剂次效果；③为虫媒病毒共流行区提供经济高效的防控工具。值得注意的是，该疫苗对亚洲株CHIKV和我国新疆分离WNV株的特异性保护效果，以及是否存在抗体依赖增强效应(ADE)仍需进一步验证。这些发现不仅为WNV和CHIKV疫苗开发提供新范式，也为其他虫媒病毒联合疫苗设计奠定技术基础。