靶向c-MYC G-四链体的吲哚喹喔啉衍生物IQ2通过调控宿主免疫清除杜氏利什曼原虫

本研究针对内脏利什曼病(VL)现有疗法耐药性强、免疫抑制严重的临床困境，通过铜催化叠氮-炔环加成反应合成新型吲哚喹喔啉衍生物IQ2。该分子能特异性稳定c-MYC启动子区G-四链体(G4)，抑制c-MYC转录并激活TLR4-MAPK通路，使巨噬细胞从促病的M2表型转为宿主保护性的M1表型，显著提升NO和促炎因子(IFN-γ/IL-12/TNF-α)水平，在μM浓度下即可高效清除胞内无鞭毛体。该研究首次揭示宿主G4结构可作为抗寄生虫药物靶点，为开发宿主导向疗法提供新策略。

　　

内脏利什曼病是由杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani, L.d)引发的致命寄生虫病，全球每年约70万新发病例。现有化疗药物存在毒性大、耐药性高等问题，而寄生虫通过上调宿主巨噬细胞c-MYC表达，诱导免疫抑制性M2表型极化，形成"免疫逃逸-寄生虫增殖"的恶性循环。c-MYC作为调控细胞增殖和免疫应答的关键转录因子，其启动子区富含鸟嘌呤的NHE III₁序列可形成G-四链体(G-quadruplex, G4)结构，成为小分子干预的新靶点。

印度科学培育协会化学科学学院Jyotirmayee Dash团队设计合成了一系列三唑取代的6H-吲哚[2,3-b]喹喔啉衍生物(IQ1-3)。其中吡咯烷修饰的IQ2通过铜催化点击化学高效构建，其平面芳香体系与氨基侧链赋予特异性结合G4的能力。研究发表于《NAR Molecular Medicine》，揭示了IQ2通过"靶向宿主G4-重编程免疫"的双重机制实现抗寄生虫感染。

关键技术包括：FRET熔解实验和等温滴定量热法(ITC)验证IQ2对c-MYC G4的特异性结合；双荧光素酶报告系统检测启动子活性；qRT-PCR和Western blot分析基因表达；Giemsa染色和共聚焦显微镜定量胞内无鞭毛体；ELISA和Griess法检测细胞因子及NO水平。

主要结果
A. IQ2选择性识别c-MYC G-四链体
FRET实验显示IQ2使c-MYC G4熔解温度(ΔT_m)提升11.8°C，显著优于其他G4(BCL2/c-KIT1等)。ITC测定其结合解离常数K_d=1.7μM，1D ¹H NMR显示IQ2与c-MYC22外端鸟嘌呤(G4/G8/G13)相互作用。

B. 高效抗寄生虫活性
IQ2对前鞭毛体和无鞭毛体的IC₅₀分别为0.18μM和1μM，较标准药米替福新(IC₅₀=9μM)活性提升50倍，且对THP1巨噬细胞毒性低(IC₅₀>50μM)。5μM IQ2处理可使感染巨噬细胞内无鞭毛体减少96%。

C. c-MYC转录抑制机制
双荧光素酶报告系统证实IQ2使野生型c-MYC启动子活性降低60%，但对G→A突变体无影响。Western blot显示1μM IQ2处理使感染细胞c-MYC蛋白水平下降85%。

D. 免疫调控作用
IQ2处理使M1标志基因(IFN-γ/IL-12/TNF-α)表达上调2-3倍，同时抑制M2相关因子(IL-10/IL-4/TGF-β)。iNOS表达提升2.5倍伴随NO产量增加，TLR4蛋白及下游p-ERK/p-JNK/p-p38磷酸化水平显著升高。

该研究首次证明靶向宿主c-MYC G4的小分子可通过表观遗传调控重塑抗利什曼免疫应答。IQ2的独特优势在于：①突破寄生虫耐药机制，通过宿主靶向减少选择压力；②双功能设计兼具直接杀寄生虫和免疫激活作用；③μM级低浓度高效性。为开发抗感染宿主导向疗法提供新范式，其G4靶向策略可拓展至其他免疫失调相关疾病。研究局限性在于尚未开展动物模型验证，且需进一步优化IQ2的药代动力学特性。