基于表达HPV16 E6/E7的4T1腺癌细胞新型小鼠模型评估治疗性及预防性E6/E7疫苗的疗效

本研究针对HPV16相关癌症治疗疫苗开发缺乏可靠动物模型的问题，通过构建稳定表达HPV16 E6/E7的4T1luc2小鼠乳腺癌细胞模型（B2/H6亚克隆），系统评估了E6/E7 DNA疫苗在预防和治疗场景下的效果。研究发现E6疫苗可诱导Th1型免疫反应并抑制肿瘤生长，而E7疫苗虽无特异性免疫原性但引发全身炎症。该模型克服了传统TC-1模型在转移模拟和蛋白表达方面的局限，为HPV疫苗研发提供了更严格的评估平台。

　　

人乳头瘤病毒16型（HPV16）是导致宫颈癌等恶性肿瘤的主要病原体，其致癌性主要依赖于E6和E7两种癌蛋白。尽管预防性HPV疫苗已取得显著成效，但针对已感染者的治疗性疫苗研发仍面临挑战——关键瓶颈在于缺乏能准确模拟人类疾病特征的动物模型。传统TC-1模型存在E6蛋白表达缺失、转移能力不足等缺陷，导致许多临床前有效的疫苗在人体试验中折戟沉沙。

拉脱维亚斯特拉金什大学（Riga Stradins University）的研究团队另辟蹊径，选择具有强转移特性的小鼠乳腺腺癌细胞4T1luc2作为平台，通过慢病毒转导构建了稳定表达HPV16 E6/E7的B2和H6亚克隆。这些细胞不仅高表达E6/E7 mRNA（较TC-1高3-20倍），还能产生与人类肿瘤相似的可变剪接体E6I/E6II，更重要的是能在皮下接种后自发形成肺转移灶，完美复现了HPV相关癌症的核心特征。

研究采用三大关键技术：1）基于临床HPV16分离株设计突变型DNA疫苗（pVaxE6/pVaxE7）；2）通过数字微滴PCR（ddPCR）和RT-qPCR定量分析E6/E7表达谱；3）结合生物发光成像（BLI）和组织病理学动态评估肿瘤生长与转移。在预防性实验中，BALB/c小鼠接种疫苗后接受肿瘤细胞攻击；治疗性实验则在肿瘤植入后接种疫苗，通过流式细胞术分析T细胞免疫反应。

E6/E7表达特征验证
B2和H6亚克隆持续高表达E7及E6剪接变体（E6*I占主导），且随传代表达量显著增加（图1B-E）。与TC-1不同，这些细胞在体内外均检测到E6全长转录本，更接近人类肿瘤特征（表3）。

肿瘤模型建立
皮下接种1×10⁴个B2/H6细胞后，所有小鼠均形成实体瘤（图2A），体积与亲本细胞无差异（图2B）。通过BLI和PCR证实75%动物出现肺浸润（图3），组织学观察到血管周围转移灶（图4），而TC-1模型则无此特性（图8B）。

疫苗免疫原性
E6疫苗诱导CD4⁺ T细胞对E6_1-58和E6_110-158表位的强烈应答（图5A），未刺激细胞即分泌IFN-γ/IL-2（图7A-B）；E7疫苗虽未激发特异性反应，但导致TNF-α升高和肝脏微肉芽肿形成（图7C,F）。值得注意的是，E6 NLS1区域的R15残基对免疫识别至关重要（图6G）。

治疗效果评估
预防性接种中，E6使B2/H6肿瘤体积减小42%（p=0.023），肺转移光子通量降低60%（图10C）；治疗性接种仅短暂抑制B2肿瘤生长（图12A-B）。相比之下，E6在TC-1模型中可使肿瘤缩小20-30%（图8A），凸显新模型更严苛的评估标准。

这项研究开创性地建立了能同步评估原发灶控制和转移抑制的HPV疫苗测试平台。B2/H6模型通过再现E6/E7表达异质性和自发转移特性，暴露出传统疫苗设计中的潜在缺陷——如E7引发的肝毒性风险（图11B）和E6免疫优势性对联合疫苗的抑制作用（图5C）。发表在《Infectious Agents and Cancer》的成果为优化治疗性疫苗提供了三大启示：1）需开发规避E7毒性的新抗原形式；2）应针对E6可变剪接体设计多表位疫苗；3）转移抑制应成为疗效核心指标。该模型的应用将加速下一代HPV治疗疫苗的临床转化进程。