基于5.8S-ITS2 rDNA分子鉴定的菲律宾人群粪便样本中异形科吸虫多样性研究

为解决异形科吸虫(Heterophyidae)卵形态相似导致的物种鉴定难题，研究人员采用巢式PCR和5.8S-ITS2 rDNA测序技术，对菲律宾莱特省和北达沃省的10例人粪便样本进行分子鉴定。结果显示所有样本均感染台湾单睾吸虫(Haplorchis taichui)，并发现1例湄公河肝吸虫(Opisthorchis viverrini)及2个Haplorchis sp.新基因型，为菲律宾医学吸虫多样性研究提供了重要分子依据。

　　

在东南亚地区，生食鱼片的饮食习惯使得异形科吸虫(Heterophyidae)感染成为重要的公共卫生问题。这些体长不足2毫米的肠道吸虫能引起异形吸虫病(heterophyidiasis)，其虫卵在显微镜下与华支睾吸虫(Clonorchis)、后睾吸虫(Opisthorchis)等近似，传统Kato-Katz粪检法难以准确区分。菲律宾作为群岛国家，鱼类消费普遍，但当地异形科吸虫的物种组成和分子特征长期缺乏系统研究。

为破解这一难题，研究人员在《Parasitology International》发表论文，采用巢式PCR(nested PCR)和DNA测序技术，对菲律宾莱特省(Leyte)和北达沃省(Davao del Norte)的10份人粪便样本进行5.8S-ITS2 rDNA区域分析。该区域包含高度变异的内部转录间隔区2(ITS2)和保守的5.8S核糖体RNA基因，是鉴别近缘吸虫的理想分子标记。

技术方法上，研究首先通过Kato-Katz法初筛阳性样本，随后提取基因组DNA，设计特异性引物进行两轮PCR扩增。第一轮PCR使用通用引物，第二轮采用巢式引物提高特异性。扩增产物经测序后，与GenBank数据库进行BLAST比对，并构建系统发育树分析遗传关系。

研究结果部分，在"Molecular identification"章节中发现：所有10个样本的序列均与越南报道的台湾单睾吸虫(H. taichui)高度同源（99.6-100%），证实该物种是菲律宾优势致病种。值得注意的是，在"Novel genotypes detection"部分揭示：样本中鉴定出两个新的单睾吸虫(Haplorchis sp.)基因型，其ITS2序列存在3-5个碱基差异，提示菲律宾可能存在未被描述的吸虫物种。最令人警惕的是"Opisthorchis viverrini co-infection"部分：1例样本中检测到湄公河肝吸虫(O. viverrini)，这种本属后睾科(Opisthorchiidae)的病原体因系统发育位置嵌套在异形科中，常被误判为异形吸虫，其强致胆管癌特性使该发现具有重要临床意义。

讨论部分强调，这是首次在菲律宾人群体内通过分子技术确认台湾单睾吸虫感染，证实了越南与菲律宾菌株的遗传连续性，可能反映两国间通过鱼类贸易或移民造成的病原传播。发现的两个新基因型为后续物种描述提供了线索，而湄公河肝吸虫的检出则警示需加强食源性寄生虫的跨境监测。该研究建立的5.8S-ITS2 rDNA分析方法，为热带地区肠道吸虫的精准诊断提供了可靠工具，对制定差异化的防治策略具有指导价值。