PLGA纳米颗粒共载Mn2+和丹参多糖增强H9N2灭活疫苗免疫效力的机制研究

本研究针对H9N2禽流感疫苗免疫原性不足的难题，创新性地开发了PLGA包封Mn2+/丹参多糖(SMP)的纳米佐剂系统(MS-PLGA-H9N2)。通过多组学分析和免疫学评价，证实该纳米疫苗能同时激活Th1/Th2免疫应答，显著提升IgG抗体效价和HI滴度，并促进CD4+/CD8+T细胞活化及IFN-β分泌，为禽流感疫苗研发提供了新型佐剂策略。

　　

禽流感病毒H9N2亚型作为低致病性禽流感的主要亚型，不仅造成全球家禽业的重大经济损失，更因其易发生基因重组被WHO列为潜在人畜共患病原体。当前油佐剂灭活疫苗虽广泛应用，但存在免疫持续时间短、难以激活细胞免疫等缺陷。河北农业大学动物医学院的研究团队创新性地将传统中药活性成分与现代纳米技术相结合，开发出具有临床转化潜力的新型疫苗佐剂系统，相关成果发表于《Poultry Science》。

研究采用双乳化法制备了包封Mn²⁺、丹参多糖(SMP)和H9N2灭活抗原的PLGA纳米颗粒(MS-PLGA-H9N2)，通过动态光散射和透射电镜表征其理化性质。选用90羽AA肉鸡建立动物模型，设置PBS对照、单纯抗原、铝佐剂、油佐剂等6个实验组，通过ELISA、HI试验、流式细胞术等技术系统评估免疫效果，并整合转录组和蛋白组学解析作用机制。

表征MS-PLGA-H9N2纳米颗粒
制备的纳米颗粒平均粒径219.6±5.10 nm，zeta电位-17.7±0.7 mV，抗原包封率达69.40%。电镜显示颗粒呈规则球形，4℃储存14天保持良好稳定性，满足疫苗制剂的基本要求。

体重与抗体监测
免疫后35天，MS-PLGA-H9N2组鸡只体重显著高于对照组(p<0.05)。抗体检测显示该组在免疫后21-35天持续维持最高IgG水平和HI滴度(1:128)，显著优于传统油佐剂组，证实PLGA缓释系统可延长免疫刺激时间。

外周血淋巴细胞活化与细胞因子分泌
流式分析发现MS-PLGA-H9N2组CD3⁺CD4⁺和CD3⁺CD8⁺T细胞比例分别提高至38.7%和29.3%。血清细胞因子检测显示IFN-γ(Th1)、IL-6(Th2)和IFN-β水平同步上升，呈现Th1/Th2平衡激活特征，其中IFN-β浓度达156.7 pg/mL，证实Mn²⁺成功激活了cGAS-STING通路。

生物安全性评价
血清生化指标(ALT、AST等)与对照组无显著差异，脾脏、法氏囊等免疫器官HE染色未见病理损伤，显示纳米佐剂具有良好的生物相容性。

多组学机制解析
转录组测序发现MS-PLGA-H9N2组144个基因显著上调，涉及IFNW1、GZMA等免疫相关基因。联合蛋白组学分析揭示ABC转运体和细胞因子-受体相互作用通路显著富集，与免疫荧光显示的脾脏CD4⁺/CD8⁺T细胞活化现象相互印证。

该研究首次证实PLGA包封的Mn²⁺/SMP复合佐剂能突破传统油佐剂的局限性，通过激活多重免疫通路产生协同增效作用。特别是Mn²⁺诱导的IFN-β分泌为抗病毒免疫提供了新维度，而SMP的免疫调节作用则确保了Th1/Th2反应的平衡。这种"中药活性成分-免疫激动剂-纳米载体"三位一体的设计策略，不仅为禽流感疫苗研发提供了新思路，也为其他亚型流感疫苗的佐剂开发提供了重要参考。未来通过攻毒实验验证其保护效力后，该技术有望转化为临床可用的新型兽用疫苗制剂。