两种鳃黏液采集方法对金头鲷免疫相关参数的影响比较：低侵入性与侵入性方法的评估

为解决鱼类鳃黏液免疫特性研究中的采样方法标准化问题，研究人员比较了低侵入性（棉签法）与侵入性（解剖法）两种采集方式对金头鲷（Sparus aurata）鳃黏液免疫参数的影响。结果显示，低侵入性方法获得的样本中IgM水平、过氧化物酶活性及抗菌活性（针对Vibrio harveyi和V. anguillarum）显著更高，为水产健康监测提供了更优方法。该研究为鱼类黏膜免疫研究及动物福利实践提供了重要参考。

　　

鱼类鳃黏液作为呼吸器官的第一道防线，其免疫特性研究长期受限于采样方法的标准化难题。鳃黏膜相关淋巴组织（Gill-associated lymphoid tissue, GIALT）富含免疫球蛋白、抗菌肽等防御分子，但现有研究多集中于皮肤和肠道黏液，鳃黏液因采样困难而数据匮乏。尤其在水产养殖中，鳃部疾病（如弧菌病、隐核虫病）常导致重大损失，亟需建立可靠的鳃黏液免疫参数检测方法以评估鱼类健康状态。

针对这一需求，西班牙穆尔西亚大学（University of Murcia, UMU）的研究团队在《Fish 》发表论文，首次系统比较了两种鳃黏液采集方法——低侵入性棉签法（Approach 1）与侵入性解剖法（Approach 2）对金头鲷免疫参数的影响。研究通过测量总蛋白、IgM水平、6种酶活性及3种病原菌的杀菌活性，发现低侵入性方法能更有效保留免疫分子活性，为无创监测鱼类健康提供了技术支撑。

关键技术包括：1）棉签法采集活体鳃黏液（n=16）与解剖法获取离体样本（n=16）；2）Bradford法测总蛋白；3）ELISA定量IgM；4）酶标法检测溶菌酶（lysozyme）、过氧化物酶（peroxidase）等活性；5）MTT法评估对Vibrio harveyi等病原菌的杀菌活性。

研究结果显示：

1. 总蛋白与IgM水平：棉签法样本的总蛋白浓度（2.1 mg mL^?1）显著高于解剖法（1.3 mg mL^?1），IgM水平亦高出40%，提示低侵入性方法更利于保留大分子免疫物质。
2. 酶活性差异：过氧化物酶与碱性磷酸酶仅棉签法可检出，而酯酶仅见于解剖法样本，反映采样方式对酶稳定性的选择性影响。
3. 病原菌抑制：棉签法样本对V. harveyi和V. anguillarum的杀菌活性（70%-75%）显著优于解剖法（50%-55%），但对Photobacterium damselae无差异，表明方法敏感性因病原体而异。

讨论部分指出，棉签法的优势可能源于其避免了解剖过程中的应激反应和蛋白降解。该研究不仅填补了海水鱼类鳃黏液免疫研究的空白，还为水产病害防控提供了新思路——通过非侵入性采样监测鳃部免疫状态，既能提升动物福利，又可早期预警疾病风险。未来研究可进一步优化棉签法在感染模型中的应用，并探索其与血清免疫参数的关联性。