大黄鱼mapkk基因家族鉴定及其在嗜水气单胞菌和假单胞菌感染免疫应答调控中的作用

为解决大口黑鲈病毒(LMBV)感染导致的养殖业重大损失，研究人员针对病毒主要衣壳蛋白(LMBV-MCP)开展免疫优势表位筛选研究。通过分段表达获得M1-M4蛋白片段，发现M2和M3片段能显著提升血细胞计数、免疫酶活性(AKP/SOD/ACP/T-AOC)和免疫基因(TNF-α/IgM/MHCI-α等)表达，使相对存活率(RPS)分别达64.9%和70.7%，鉴定出M3为关键免疫表位，为开发高效LMBV亚单位疫苗奠定基础。

　　

在全球水产养殖业蓬勃发展的背景下，大口黑鲈(Micropterus salmoides)因其生长快、适应性强等特点已成为我国重要经济鱼种，年产量突破88万吨。然而随着养殖密度增加，病毒性疾病成为制约产业发展的瓶颈。其中大口黑鲈病毒(LMBV)自2008年首次分离以来，已造成严重经济损失，其典型症状包括皮肤溃疡、肝脏出血等组织病变，死亡率高达90%。传统疫苗存在免疫原性不足等问题，而主要衣壳蛋白(MCP)作为病毒40-45%的结构组分，虽具疫苗开发潜力，但其关键免疫表位尚未明确。

西南大学的研究团队从四川广安发病养殖场采集典型病样，通过EPC细胞分离获得LMBV毒株。基于结构生物学分析将LMBV-MCP基因划分为M1-M4四个区段进行原核表达。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各片段与阳性血清的亲和力，并通过腹腔注射评估免疫效果。实验设置空白对照和全长蛋白对照组，监测血细胞参数、免疫酶活性及基因表达变化，最后进行攻毒实验计算相对存活率(RPS)。

临床与病理学观察显示，自然感染鱼体呈现鳃丝腐蚀、皮肤溃疡等典型症状，组织切片可见肝细胞坏死、脾脏含铁血黄素沉积等病变。实验感染成功复制自然发病过程，证实心脏、肝脏和脾脏是主要靶器官。抗原性分析表明M2(第2区段)和M3(第3区段)与阳性血清结合力最强。免疫学检测发现，M2/M3组能显著提升红细胞、淋巴细胞等血细胞数量，使碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)等免疫酶活性提高1.5-2.3倍，同时上调肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、免疫球蛋白M(IgM)等基因表达2.1-5.8倍。攻毒保护实验显示，M3组RPS达70.7%，显著高于全长蛋白组(61.4%)，证实其含有关键免疫表位。

该研究首次系统鉴定了LMBV-MCP的免疫优势表位，发现M3区段能诱导最强烈的保护性免疫应答。这不仅为开发高效亚单位疫苗提供理论依据，其建立的表位筛选策略也可应用于其他水产病毒疫苗研发。研究结果对减少抗生素滥用、推动水产养殖业绿色发展具有重要意义，相关成果发表在《Fish》期刊。值得注意的是，实验中分离到的嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)提示实际养殖中需关注继发感染问题，这为复合疫苗开发指明了方向。