基于LMBV-MCP免疫优势表位筛选的口鲈抗病毒疫苗开发研究

针对大口黑鲈病毒(LMBV)肆虐造成的养殖业损失，研究人员通过分段表达主要衣壳蛋白(LMBV-MCP)，筛选出M2/M3免疫优势表位，实验证实其可显著提升血细胞计数、免疫酶活性(AKP/SOD/ACP/T-AOC)及免疫基因(TNF-α/IgM等)表达，疫苗接种组相对存活率(RPS)达64.9%-70.7%，为开发高效LMBV亚单位疫苗奠定基础。

　　

随着水产养殖业集约化发展，大口黑鲈(Micropterus salmoides)作为全球重要经济鱼种，其养殖规模已突破年产量88万吨。然而种质退化、抗生素滥用及高密度养殖导致病毒性疾病频发，其中大口黑鲈病毒(Largemouth bass virus, LMBV)自2008年暴发以来，已造成重大经济损失。该病毒属于虹彩病毒科，其核心结构蛋白——主要衣壳蛋白(Major capsid protein, MCP)占病毒总蛋白40%-45%，既是病毒入侵宿主细胞的关键媒介，又是诱发免疫应答的主要抗原。但传统全蛋白疫苗存在免疫原性不足和过敏风险，精准识别MCP中的免疫优势表位成为疫苗研发的突破口。

西南大学水产学院的研究团队从四川广安病鲈样本中分离出LMBV毒株，通过组织病理学证实其可引发肝脾坏死、肾小管溶解等典型病变。研究人员创新性地将LMBV-MCP基因划分为M1-M4四个片段进行原核表达，采用ELISA技术筛选出与阳性血清抗体结合力最强的M2/M3片段。动物实验显示，接种M3的试验组相对存活率(RPS)达70.7%，显著高于全蛋白组的61.4%。机制研究表明，M2/M3能特异性激活先天免疫和体液免疫：不仅使红细胞、淋巴细胞数量提升2-3倍，还显著增强超氧化物歧化酶(SOD)、酸性磷酸酶(ACP)等免疫酶活性，并上调TNF-α、IgM等免疫基因表达5-8倍。

关键技术包括：从自然感染病鲈分离LMBV毒株、MCP分段原核表达系统、血清抗体亲和力ELISA检测、血细胞自动计数仪分析、实时荧光定量PCR(qPCR)检测免疫基因等。

【临床症状和病理组织学】
病鲈呈现鳃丝溃烂、体表出血等典型症状，组织学显示肝细胞空泡化、脾脏含铁血黄素沉积等特征性病变，电镜检测确认病毒颗粒存在。

【免疫优势表位筛选】
结构预测将MCP划分为N端M1(1-200aa)、M2(201-400aa)、M3(401-600aa)和C端M4(601-810aa)，其中M2/M3片段抗体结合效价较对照组高3-5倍。

【免疫保护效应】
M3疫苗接种组在攻毒实验中存活率最高，其血清中和抗体滴度与CD8⁺ T细胞活性呈正相关，证实细胞免疫与体液免疫的协同保护作用。

该研究首次阐明LMBV-MCP的免疫优势表位位于M3结构域，为开发精准化亚单位疫苗提供理论依据。相比传统灭活疫苗，表位疫苗可避免非特异性免疫反应，其64.9%-70.7%的RPS值已达到商业化疫苗门槛。研究团队提出的"结构指导的表位分段策略"为其他水产病毒疫苗研发提供了可借鉴的技术路线，对推动水产养殖业绿色可持续发展具有重要意义。论文发表于《Fish》期刊，通讯作者为西南大学汉兆芳(Zhao-Fang Han)和朱松(Song Zhu)教授。