小檗碱通过调控EIF2AK2二聚化治疗单纯疱疹病毒性角膜炎的作用机制研究

针对单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)现有疗法耐药性和副作用问题，研究人员探索天然化合物小檗碱(BBR)通过靶向真核翻译起始因子2α激酶2(EIF2AK2)二聚化的治疗机制。研究发现BBR能直接结合EIF2AK2，阻断HSV-1诱导的二聚化及核因子κB(NF-κB)通路激活，显著抑制病毒复制并降低复发风险，为HSK治疗提供新策略。

　　

单纯疱疹病毒性角膜炎(HSK)是全球感染性致盲的首要病因，主要由HSV-1感染引发，每年造成约150万新发病例，其中4万例导致严重视力损害。现有抗病毒药物如阿昔洛韦(ACV)存在耐药性、肾毒性等问题，亟需开发新疗法。真核翻译起始因子2α激酶2(EIF2AK2/PKR)作为宿主抗病毒应答关键调控因子，其异常激活会加剧炎症损伤，但如何精准调控其活性仍是难题。

广西自然科学基金等项目支持的研究团队发现，中药黄连提取物小檗碱(BBR)能显著抑制HSV-1复制（包括ACV耐药株），EC₅₀低至3.907-5.821 μM。通过分子对接和微尺度热泳动(MST)证实BBR直接结合EIF2AK2；分子动力学(MD)模拟和免疫共沉淀(Co-IP)揭示其阻断HSV-1诱导的EIF2AK2二聚化及自磷酸化；CRISPR/Cas9基因编辑和腺相关病毒(AAV)干预实验证实EIF2AK2是BBR起效的关键靶点。RNA测序发现BBR通过抑制EIF2AK2/NF-κB轴下调病毒基因复制相关蛋白ICP27、ICP0表达。

主要技术方法包括：建立UV诱导的HSK复发小鼠模型，采用分子对接/MST验证药物-靶点互作，通过MD模拟分析蛋白构象变化，利用CRISPR/Cas9构建EIF2AK2敲除细胞模型，结合AAV进行体内靶向干预。

研究结果显示：

1. 体外抗病毒活性：BBR对HSV-1/F和HSV-1/Blue（ACV耐药株）的EC₅₀分别为5.821 μM和3.907 μM，显著优于ACV（9.259 μM）。
2. 靶点验证：MST测定BBR与EIF2AK2结合常数为1.26 μM，分子对接显示其结合于EIF2AK2二聚界面。
3. 机制解析：BBR破坏EIF2AK2二聚化，减少IKK-β磷酸化，抑制NF-κB核转位，从而降低炎症因子IL-6、TNF-α水平。
4. 体内疗效：小鼠模型中BBR使角膜病变评分降低67%，复发率下降54%，且EIF2AK2敲除后疗效消失。

结论部分强调，该研究首次阐明EIF2AK2二聚化在HSK发病中的核心作用，揭示BBR通过"EIF2AK2二聚化-NF-κB"轴发挥治疗效应的分子机制。不仅为HSK提供了新型候选药物，也为其他病毒性角膜炎的靶向治疗提供理论依据。论文发表于《Phytomedicine》，其创新性体现在：①发现EIF2AK2二聚化是HSK治疗新靶点；②解析BBR多靶点协同作用机制；③为天然药物抗病毒研究提供范式。