塞内卡病毒A（SVA）VP4蛋白单克隆抗体识别表位的鉴定及其在疫苗开发中的潜在应用

这篇研究首次鉴定了塞内卡病毒A（SVA）VP4蛋白的关键B细胞表位7SKDNFD12，该表位在病毒粒子内部动态暴露，具有高度保守性。通过原核表达纯化VP4蛋白，成功制备了具有中和活性的单克隆抗体4E4，为SVA疫苗质量评估（如146S抗原检测）和新型诊断工具开发提供了分子基础，填补了VP4蛋白免疫学特性的研究空白。

　　

背景
塞内卡病毒A（SVA）作为小RNA病毒科成员，近年来在全球猪群中引发水疱性疾病，临床症状与口蹄疫（FMD）高度相似，给畜牧业造成重大经济损失。VP4蛋白作为SVA衣壳内部最小结构蛋白，在病毒粒子组装和宿主细胞膜穿透过程中起关键作用，但其抗原表位和功能机制长期未被阐明。

材料与方法
研究团队以SVA/HLJ/CHA/2016毒株为模板，通过原核表达系统（pET-30a+/BL21）获得可溶性VP4蛋白（16 kDa）。采用ISA-201佐剂免疫BALB/c小鼠，经三次免疫后筛选高效价血清，通过细胞融合（SP2/0骨髓瘤细胞）和三次亚克隆获得稳定分泌4E4单抗的杂交瘤细胞株。中和实验采用SVA-eGFP（50 TCID₅₀）评估抗体活性，表位定位则通过构建GST标签融合的VP4截短体（如GST-VP4-1-25）进行Western blot分析。

结果

1. 表位精确定位：4E4单抗特异性识别VP4蛋白N端1-13氨基酸区域，最小功能性表位确定为⁷SKDNFD¹²。N端缺失Ser⁷或C端缺失Asp¹²均导致抗体结合活性丧失。
2. 结构特征：AlphaFold预测显示该表位位于VP4蛋白表面不规则卷曲区，多序列比对证实其在全球SVA分离株中高度保守（仅个别毒株存在单点突变）。
3. 功能验证：4E4单抗能识别SVA感染细胞（IFA验证），并在16倍稀释（10 TCID₅₀）时仍显示部分中和活性，提示VP4在病毒入侵过程中可能发生构象暴露。

讨论
VP4蛋白的动态暴露机制与口蹄疫病毒（FMDV）146S完整粒子降解为12S产物的过程类似。虽然4E4中和活性较弱（可能因表位内部定位），但为开发SVA疫苗质量检测方法（如区分完整病毒与降解产物）提供了特异性工具。研究首次揭示VP4可作为中和抗体靶点，其介导的膜穿孔机制（与脊髓灰质炎病毒VP4类似）为理解SVA入侵机制开辟新视角。

未来方向
建议采用真核表达系统获取天然构象VP4蛋白，结合戊二醛固定病毒粒子免疫策略，以发掘更多中和表位。同时可探索VP4与VP2单抗联用，建立基于ELISA的疫苗抗原定量检测体系。

结论
该研究不仅填补了SVA VP4蛋白免疫学研究空白，其鉴定的保守表位⁷SKDNFD¹²更为诊断试剂开发、疫苗设计及病毒入侵机制研究提供了关键分子靶标。