UPLC指纹图谱结合单标记物多组分定量分析用于益清颗粒质量评价的创新方法

本研究创新性地整合UPLC（超高效液相色谱）指纹图谱技术、单标记物多组分定量分析（QAMS）及化学计量学方法，建立了一种快速、经济的益清颗粒（YQGs）质量评价体系。通过以盐酸小檗碱为内参物，实现12种活性成分（包括生物碱、黄酮及蒽醌类）同步检测，结合相似度分析（SA）、主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA），揭示不同厂家产品的质量差异，为中药复方制剂质量控制提供新范式。

　　

研究背景

益清颗粒（YQGs）作为中国临床常用中成药，由黄连、大黄和黄芩组成，具有清热解毒、凉血活血的功效。然而，现行药典仅以黄芩苷为质控指标，难以全面反映其复杂成分体系的质量差异。传统高效液相色谱（HPLC）方法存在分析时间长、对照品成本高、数据整合能力不足等局限，亟需建立更高效、经济的质量评价方法。

研究方法

研究采用超高效液相色谱-光电二极管阵列检测器（UPLC-PAD）技术，优化流动相为0.2%磷酸溶液（三乙胺调pH至3）-乙腈梯度洗脱系统，27分钟内实现12种成分的基线分离。以盐酸小檗碱为内参物，通过斜率法计算其他11种成分（如黄连碱、黄芩苷、大黄素等）的相对校正因子（RCF），建立QAMS定量模型。同时，采集17批次不同厂家样品的UPLC指纹图谱，结合相似度评价系统与化学计量学（PCA、OPLS-DA等）进行多维数据分析。

关键发现

1. 方法学验证：QAMS法与外标法（ESM）的定量结果偏差<5%，RCF在不同色谱柱、仪器和流速条件下RSD<5%，显示优异的重现性。
2. 指纹图谱特征：识别32个共有峰，相似度>0.9，其中12个成分通过对照品指认，包括生物碱（峰8、9、13）、黄酮（峰12、21）和蒽醌类（峰26、30）。
3. 质量差异标志物：OPLS-DA筛选出5个VIP>1的关键差异成分（汉黄芩苷、大黄酚等），揭示不同厂家产品因原料来源或工艺差异导致的质量波动。

应用价值

该研究突破传统“一标一测”限制，通过QAMS将检测成本降低60%，分析时间缩短至0.5小时。提出的“成分检测-质量评估”耦合策略，为中药复方标准化研究提供技术模板，尤其适用于缺乏对照品或成分复杂的中药体系。

结论

UPLC-QAMS-化学计量学三联法兼具高效性、经济性与科学性，不仅适用于益清颗粒的批次放行检验，还可推广至其他中药制剂的质量控制，推动中药质量评价从单一指标向多维度综合评估转型。