无酚高效提取法：大肠杆菌HT115菌株双链RNA的绿色分离新策略

为解决传统酚-氯仿法提取双链RNA(dsRNA)存在的环境危害与纯化步骤繁琐问题，研究人员开发了基于甲醇-氯仿相分离与PEG-8000沉淀的无酚提取法。该方案通过DNA水解和分子量选择性沉淀，实现了目标dsRNA含量达25%的高效提取，为RNA干扰研究提供了经济环保的技术路径。

　　

这项研究突破性地建立了无酚条件下从大肠杆菌(E. coli)HT115菌株中分离双链RNA(dsRNA)的完整方案。传统依赖酚-氯仿的核酸提取方法不仅存在环境毒性，还需额外纯化步骤。研究人员创新性地采用甲醇替代酚试剂，在细菌热裂解后先行DNA水解，随后通过甲醇-氯仿相分离实现RNA与蛋白质的分级，最后利用聚乙二醇-8000(PEG-8000)选择性沉淀高分子量RNA。

实验数据显示，该方案可获得目标dsRNA含量高达25%的提取产物，且批次间重复性优异。相较于传统方法，所得dsRNA无需后续纯化即可直接用于实验，这在RNA干扰(RNAi)基础研究和应用开发领域具有重要价值。值得注意的是，目前尚未有方法能实现100%目标分子纯化，但该技术通过优化细胞裂解与核酸沉淀流程，显著提升了产物得率。

该方法的建立为实验室规模的dsRNA制备提供了环保、经济的解决方案，其核心创新在于将常规纯化技术巧妙整合至提取流程中。虽然农业级放大生产可能需要工艺调整，但这项技术在推动RNAi研究方面展现出显著优势，特别是避免了危险试剂的使用并简化了操作流程。研究结果证实，通过合理设计相分离条件和沉淀参数，完全可以实现不依赖酚类试剂的高质量dsRNA制备。