靶向CSF1R增强CD8+T细胞抗膀胱癌效应的机制研究

本研究针对膀胱癌(BLCA)免疫治疗响应率低的临床难题，通过敲除CD8+T细胞中的集落刺激因子1受体(CSF1R)，发现其可显著抑制肿瘤增殖迁移并重塑免疫微环境。中南大学湘雅医院团队结合161例患者队列分析与动物实验，揭示CSF1R通过调控肌酸激酶(Ckm)影响CD8+T细胞功能，为BLCA免疫治疗提供新靶点。

　　

膀胱癌作为泌尿系统高发恶性肿瘤，其五年生存率在过去十年未见显著提升，免疫治疗响应率仅20-30%。这种治疗困境与肿瘤微环境(TME)中CD8⁺T细胞功能耗竭密切相关。集落刺激因子1受体(CSF1R)作为III型受体酪氨酸激酶，虽在结直肠癌等肿瘤中被证实具有促癌作用，但其在膀胱癌CD8⁺T细胞中的调控机制仍是未解之谜。

中南大学湘雅医院泌尿外科团队在《Discover Oncology》发表的研究，首次揭示了CSF1R在CD8⁺T细胞中的关键作用。研究人员通过构建161例膀胱癌患者队列，发现CSF1R高表达患者预后更差（病理分期p=0.031，总生存事件p=0.030）。实验采用shRNA敲低、Transwell迁移侵袭实验、流式细胞术等技术，结合MBT2细胞裸鼠成瘤模型，证实敲除CSF1R可使肿瘤体积缩小42%（p<0.01），并显著提升CD8⁺T细胞中颗粒酶B(GZMB)和穿孔素(PERFORIN)表达水平。

主要技术方法包括：1）从161例BLCA患者组织样本进行免疫荧光染色和约登指数分析；2）采用Lipofectamine 2000转染sh-CSF1R质粒；3）建立MBT2细胞裸鼠皮下成瘤模型；4）通过流式细胞术检测脾脏和肿瘤组织免疫细胞浸润；5）采用mRNA测序和Western blot筛选关键分子。

【BLCA患者高表达CSF1R预后更差】
对161例患者组织分析显示，CSF1R在CD8⁺T细胞表达≥0.39倍的患者，其T分期（p=0.007）和组织学分级（p=0.047）显著恶化。免疫荧光显示CSF1R⁺CD8⁺T细胞在非乳头状亚型中富集（p<0.001）。

【CSF1R敲除抑制肿瘤恶性行为】
体外实验表明，敲除CSF1R使MB49细胞迁移能力下降58%（p<0.01），侵袭能力降低63%（p<0.01）。细胞杀伤实验显示肿瘤细胞数量减少41%（p<0.05）。

【动物模型验证免疫调节作用】
在体实验证实，尾静脉注射CSF1R敲除的CD8⁺T细胞后，肿瘤组织中PD1⁺CD4⁺T细胞增加2.1倍（p<0.05），脾脏GZMB⁺CD8⁺T细胞升高1.8倍（p<0.01）。

【Ckm是关键作用分子】
mRNA测序发现肌酸激酶(Ckm)表达下调3.2倍（p<0.001）。Western blot验证Ckm蛋白水平降低68%（p<0.01），提示其可能通过能量代谢途径影响T细胞功能。

该研究首次阐明CSF1R通过Ckm调控CD8⁺T细胞抗肿瘤活性的分子机制，突破性地将CSF1R从传统的髓系细胞调控因子拓展为T细胞功能调节靶点。临床转化方面，研究建立的0.39倍约登指数为患者分层提供量化标准，而动物实验中每3天5×10⁶细胞的给药方案为联合免疫治疗提供剂量参考。值得注意的是，CSF1R抑制剂与现有PD-1疗法可能存在协同效应，这为克服膀胱癌免疫治疗耐药性开辟新途径。未来研究需在更大规模多中心队列中验证CSF1R预测价值，并深入探索Ckm下游信号通路。