人血浆中酵母结合抗体的凝集特性及其对免疫诊断技术的影响研究

本研究针对酵母表面展示免疫诊断技术中存在的非特异性凝集问题，系统分析了人新鲜冰冻血浆(FFP)中酵母结合抗体(IgM/IgG)的凝集行为。研究人员通过酵母凝集试验和间接ELISA技术，发现低pH和高离子强度分别促进和抑制抗体介导的酵母凝集，且该过程独立于凝血因子活性。该研究为优化基于酵母细胞的免疫检测技术提供了关键参数指导。

　　

在真菌与人类共生和致病的复杂关系中，酵母菌作为真核模式生物被广泛应用于生物技术领域。然而，当这些微生物被开发为病原体抗体检测平台时，人体内预存的抗酵母抗体却成为"双刃剑"——它们既能识别病原体模拟表位，又会与酵母自身表面抗原结合产生假阳性。这种非特异性凝集现象严重制约了酵母表面展示技术(Yeast Surface Display)在疟疾、COVID-19等疾病诊断中的应用精度。

菲律宾大学马尼拉分校医学院生物化学与分子生物学系的研究团队在《BMC Microbiology》发表的研究，首次系统揭示了人血浆中抗酵母抗体的流行特征及其物理化学调控机制。研究人员采用36例健康供体新鲜冰冻血浆(FFP)样本，通过酵母凝集试验结合图像分析定量凝集复合物面积，联合蛋白A/G-HRP和抗IgM-HRP的间接ELISA技术，阐明了影响抗体-酵母相互作用的关键参数。

关键技术包括：(1)建立低离子强度磷酸盐缓冲液(LIP)体系下的标准化凝集试验；(2)采用ImageJ图像分析定量凝集复合物面积；(3)通过pH/离子强度调节实验揭示环境因素影响；(4)利用2M NaCl洗脱验证抗体依赖性凝集机制。样本来源于菲律宾总医院血库的匿名FFP样本。

凝集复合物的显微特征
通过光学显微镜观察到阳性样本中酵母细胞形成典型"薄片状"聚集体，与阴性样本的分散分布形成鲜明对比。凝集复合物面积与抗体浓度呈正相关，最高体积分数(0.1)时平均面积达0.63 mm²。

抗体效价与亚型特征
间接ELISA显示58.3%样本(21/36)呈现凝集活性，其中IgM阳性率(47.2%)高于IgG(41.7%)。蛋白A/G检测证实IgG亚型中IgG₁/IgG₂占主导，但IgM被证实为介导凝集的主要亚型(P<0.05)。

物理化学因素的影响
酸性环境(pH 5.6)使凝集复合物面积增加35%，而0.15M NaCl可抑制凝集活性。EDTA和柠檬酸盐处理证实凝血因子和补体蛋白不参与凝集过程(P=0.128)。

凝集蛋白洗脱验证
2M NaCl洗脱的蛋白组分保持再凝集能力，纳米滴光谱显示其260/280nm比值≤0.57，证实为抗体类蛋白。ELISA验证洗脱物含IgM/IgG，且吸光度值均超过阈值(补充表5)。

该研究首次阐明人血浆抗酵母抗体的流行率与调控规律，揭示其凝集行为具有pH敏感性和离子强度依赖性的双重特征。这些发现为优化酵母表面展示技术提供了关键参数：建议在pH 7.4的LIP体系中开展检测以平衡灵敏度和特异性。未来研究可探索酵母表面抗原修饰策略，或通过预吸附去除干扰抗体，进一步提升这类诊断工具的可靠性。值得注意的是，该现象可能与克罗恩病(抗酿酒酵母抗体阳性)等疾病的血清学诊断存在交叉影响，提示在开发泛真菌诊断平台时需考虑宿主预存免疫状态的干扰。