OTSSP167通过ROS驱动的P38/JNK和FAK/ERK通路抑制三阴性乳腺癌脑转移的机制研究

针对三阴性乳腺癌(TNBC)脑转移(BM)治疗困境，研究人员聚焦MELK抑制剂OTSSP167，揭示其通过诱导ROS过激活P38/JNK促凋亡通路、抑制FAK/ERK转移轴的双重机制，显著抑制TNBC原发灶和脑转移灶生长，且具备良好血脑屏障穿透性，为TNBC脑转移提供了新型靶向治疗策略。

　　

三阴性乳腺癌(TNBC)以其高侵袭性和早期转移特性成为乳腺癌中最凶险的亚型，其中脑转移(BM)更是导致患者生存期骤降至4-6个月的主要死因。当前治疗面临三大困境：血脑屏障(BBB)阻碍药物递送、传统放化疗响应率不足20%、缺乏针对转移微环境的靶向策略。更棘手的是，TNBC细胞通过上调基质金属蛋白酶(MMPs)和血管生成素样蛋白4(ANGPTL4)破坏血脑屏障，并利用CD36介导的脂质摄取适应脑部贫营养环境，形成"转移生态位"。

面对这一临床难题，蚌埠医学院（Bengbu Medical University）的研究团队将目光投向母体胚胎亮氨酸拉链激酶(MELK)——一种在TNBC中异常高表达且与干细胞特性、化疗抵抗密切相关的AMPK相关激酶。他们采用其特异性抑制剂OTSSP167，系统探究了其对TNBC脑转移的干预效果及分子机制，相关成果发表于《European Journal of Pharmacology》。

研究团队运用CCK-8检测细胞活力、Transwell实验评估迁移侵袭能力、流式细胞术分析细胞周期和凋亡，结合免疫荧光和Western blotting解析信号通路变化。通过建立原位移植瘤和脑趋向性转移小鼠模型，采用小动物MRI监测脑转移灶，并检测肝肾功能指标评估安全性。关键实验还引入ROS清除剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行挽救实验。

OTSSP167抑制TNBC细胞活性
CCK-8结果显示，OTSSP167呈浓度依赖性降低MDA-MB-231和BT-549细胞活力，IC₅₀分别为42.3nM和58.7nM。划痕实验显示24小时迁移抑制率达67.2%，Transwell侵袭实验表明50nM OTSSP167处理可使穿膜细胞数减少81%。

诱导细胞周期阻滞与凋亡
流式细胞术揭示OTSSP167将细胞阻滞于G1期（比例从45.8%增至72.3%），伴随CDK-2(cyclin-dependent kinase 2)磷酸化水平降低。Western blotting检测到cleaved PARP和caspase-3表达上调，凋亡率从5.1%升至34.7%。

ROS驱动的双通路调控机制
DCFH-DA探针检测显示OTSSP167使细胞内ROS水平提升3.8倍。机制研究发现：1）激活应激通路：ROS通过氧化MKP1(MAPK phosphatase 1)的Cys258残基，持续激活P38/JNK信号，触发ASK1-MKK级联反应；2）抑制转移轴：ROS氧化FAK的Cys454/Cys634，破坏其与整合素β1的结合，使ERK磷酸化水平下降62%。NAC处理可完全逆转上述效应。

体内抗肿瘤及BBB穿透性
小鼠模型显示，OTSSP167(5mg/kg)使原位瘤体积缩小68%，脑转移灶数量减少83%。值得注意的是，在脑趋向性模型中，药物组小鼠脑组织药物浓度达到血浆水平的41%，且未出现肝肾功能异常，ALT、BUN等指标与对照组无统计学差异。

这项研究首次阐明OTSSP167通过"ROS双刃剑"机制——既激活促凋亡的P38/JNK通路，又抑制促转移的FAK/ERK轴——实现对TNBC脑转移的多靶点干预。其创新性体现在三方面：1）揭示MELK-ROS-FAK/ERK调控轴在脑转移中的核心作用；2）证实OTSSP167具有BBB穿透特性，突破传统化疗药物递送瓶颈；3）提出"氧化还原重编程"治疗理念，为克服TNBC异质性和微环境适应提供新思路。研究团队特别指出，OTSSP167与现有放疗或PARP抑制剂的联合应用，可能成为改善TNBC脑转移患者生存的新策略。