大黄鱼肠道源益生菌Lactobacillus sakei YLD10的分离鉴定及其抗Pseudomonas plecoglossicida感染机制研究

针对高密度养殖中病害防控难题，研究人员从大黄鱼肠道分离获得高黏附性乳酸菌Lactobacillus sakei YLD10。研究发现该菌株通过提升消化酶活性、增强抗氧化能力及调节IL-17通路抑制过度炎症反应，显著降低Pseudomonas plecoglossicida感染死亡率，为无抗养殖策略提供新方案。

　　

随着中国水产养殖业规模跃居全球首位，高密度养殖导致的病害问题日益凸显。以大黄鱼(Larimichthys crocea)为例，其养殖过程中频发的内脏白点病（病原为Pseudomonas plecoglossicida）每年造成重大经济损失。传统抗生素使用不仅导致病原菌耐药性增强，更威胁食品安全。在此背景下，集美大学的研究团队创新性地从健康大黄鱼肠道中筛选具有益生潜力的宿主源性乳酸菌，为绿色防控提供新思路。

研究采用体外抑菌实验结合黏蛋白黏附能力测定，从12株分离菌株中优选获得Lactobacillus sakei YLD10。通过56天饲喂实验证实，该菌株能显著提升大黄鱼生长性能（增重率提高21%）、增强肠道消化酶活性（蛋白酶活性提升1.8倍），并改善肠道形态结构（绒毛长度增加35%）。在抗感染实验中，YLD10预处理使大黄鱼感染P. plecoglossicida后的存活率从对照组的42%提升至78%。转录组分析揭示其通过抑制IL-17信号通路过度激活，降低炎症因子风暴对组织的损伤。

关键技术方法

1. 宿主源性益生菌筛选：采用MRS培养基从健康大黄鱼肠道分离乳酸菌，通过酸耐受（pH 2.5）、胆盐耐受（0.3%牛胆盐）及黏蛋白黏附实验初筛
2. 体外抑菌评价：牛津杯法检测对P. plecoglossicida等3种病原菌的抑制效果
3. 动物实验：设置YLD10添加组（10⁸ CFU/g饲料）与空白对照组，56天后测定生长指标、肠道酶活及组织形态
4. 感染保护实验：经口灌服P. plecoglossicida（10⁷ CFU/尾）后监测存活率，qPCR检测肝、脾组织载菌量
5. 机制研究：RNA-seq分析差异基因通路，ELISA验证IL-17、TNF-α等炎症因子水平

主要研究结果

1. 菌株特性：YLD10对3种水产病原菌抑菌圈直径达12-18mm，黏蛋白黏附率达82.3%，显著高于其他菌株（P<0.05）
2. 生长促进：YLD10组增重率较对照组提高21.7%，肠道淀粉酶、脂肪酶活性分别提升65%和43%
3. 微生态调节：16S rRNA测序显示潜在致病菌Stenotrophomonas丰度降低4.2倍，益生菌Lactobacillus占比提升至32.4%
4. 抗感染机制：感染后YLD10组脾脏载菌量降低2个数量级，病理切片显示肠上皮完整性保持良好；IL-17信号通路关键基因IL17RA表达下调3.1倍

结论与意义
该研究首次证实宿主源性L. sakei YLD10通过"营养-免疫-微生态"三重调控机制发挥益生作用：①通过分泌有机酸竞争性抑制病原菌定植；②增强肠道物理屏障（杯状细胞数量增加2倍）；③免疫调节作用精准控制炎症反应强度。相较于传统益生菌（如Saccharomyces cerevisiae），宿主源性菌株展现出更优的生态适应性。研究成果为水产养殖病害防控提供了可替代抗生素的解决方案，相关机制对哺乳动物益生菌研究也具有借鉴价值。论文发表于《Fish》期刊，标志着我国在水产益生菌领域取得重要突破。