GluN1肽段主动免疫通过NMDAR-EphB2通路调控小鼠突触可塑性及癫痫易感性的机制研究

本研究针对抗NMDAR脑炎患者高发癫痫症状的机制难题，通过GluN1359-378肽段主动免疫建立小鼠模型，系统探究了NMDAR-EphB2相互作用对突触结构和功能的影响。研究发现抗体介导的NMDAR膜表达降低伴随EphB2/EphrinB2下调，导致突触活性区缩短、树突棘密度减少及癫痫易感性增加，为理解自身免疫性癫痫的突触病理机制提供了新视角。

　　

在神经免疫学领域，抗N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）脑炎作为最常见的自身免疫性脑炎，其57%-82%患者伴随癫痫发作的临床特征长期困扰着医学界。尽管既往研究证实患者脑脊液中NMDAR抗体会导致受体内化，但关于抗体如何通过调控突触微环境诱发癫痫仍存在认知空白。更关键的是，传统被动抗体转移模型难以模拟人体内完整的免疫应答过程，使得疾病发生发展的关键机制研究受限。

广西医科大学第一附属医院神经内科的研究团队创新性地采用GluN1_359-378肽段主动免疫策略，成功构建了能模拟人类抗NMDAR脑炎病理特征的小鼠模型。这项发表在《Molecular Neurobiology》的研究首次揭示了EphB2/EphrinB2信号通路在抗体介导的突触损伤中的核心作用，为理解自身免疫性癫痫的分子机制提供了重要线索。

研究团队运用多学科技术手段开展系统探究：通过ELISA验证模型成功率（81.25%抗体阳性率）；采用PTZ（戊四氮）癫痫诱导实验评估行为学改变；Western blot检测海马组织GluN1、PSD-95、EphB2等蛋白表达；免疫荧光共定位分析NMDAR-EphB2相互作用；透射电镜观察突触超微结构；高尔基染色量化树突棘密度变化。

模型验证与癫痫表型
通过皮下注射GluN1_359-378肽段建立的小鼠模型表现出显著增高的癫痫易感性：与对照组相比，PTZ诱导后发作潜伏期缩短45秒（144.17s vs 209.83s），IV-V级发作次数增加3倍（6.83次 vs 2.00次）。这种异常行为学改变与临床患者癫痫症状高度吻合。

膜蛋白表达异常
Western blot结果显示模型组海马神经元膜表面GluN1表达降低28%（0.69±0.19 vs 0.96±0.11），而总蛋白量不变，证实抗体诱导的特异性内化。值得注意的是，EphB2及其配体EphrinB2表达分别降低58%和35%，但支架蛋白PSD-95未见显著变化，提示抗体可能选择性破坏NMDAR的胞外锚定机制而非胞内支架结构。

共定位分析
免疫荧光显示GluN1与EphB2的共定位系数显著降低（p<0.01），直观证实抗体干扰了这两种关键蛋白的相互作用。

突触结构重塑
透射电镜发现模型组突触活性区长度、突触间隙宽度及突触后致密物厚度均显著减少（p<0.05）。

高尔基染色进一步显示树突棘密度下降，这些结构改变可能直接影响突触信号传递效率。

这项研究开创性地阐明：GluN1抗体通过破坏NMDAR-EphB2相互作用，导致受体膜表达减少和突触结构异常，最终增加神经元网络兴奋性。该发现不仅为抗NMDAR脑炎共病癫痫提供了突触可塑性解释，更提示EphB2/EphrinB2通路可能成为干预抗体神经毒性的新靶点。未来针对该通路的调节剂开发，或将为改善患者癫痫症状开辟新的治疗途径。

研究也存在若干局限：未进行脑电图同步监测可能遗漏亚临床发作信息；缺乏共免疫沉淀实验直接验证蛋白互作；对GABA能中间神经元特异性改变的探讨不足。这些都为后续研究指明了方向，包括采用空间转录组技术解析不同神经元亚群的响应差异，以及开发EphB2激动剂等干预策略的临床前评估。