Notch2通过激活Wnt2/β-catenin通路改善颗粒细胞功能治疗早发性卵巢功能不全的机制研究

本研究针对早发性卵巢功能不全(POF)的治疗困境，通过构建CY/BUS诱导的小鼠模型和CY处理的KGN细胞模型，首次揭示了Notch2通过激活Wnt2/β-catenin信号通路改善颗粒细胞(GC)功能的作用机制。研究发现Notch2过表达可显著改善激素水平、卵泡发育和氧化应激状态，而β-catenin敲除则加重卵巢损伤，为POF治疗提供了新的分子靶点。

　　

在女性生殖健康领域，早发性卵巢功能不全(Premature Ovarian Failure, POF)犹如一记"青春休止符"，让许多年轻女性提前面临生育能力丧失和更年期症状的困扰。这种疾病以40岁前卵巢功能衰退为特征，表现为闭经、不孕和雌激素缺乏，其中化疗药物导致的医源性POF尤为棘手。目前临床主要依赖激素替代疗法，但无法从根本上恢复卵巢功能，这使得探索POF的发病机制和寻找有效治疗靶点成为生殖医学的迫切需求。

杭州亨特检测生物技术有限公司的研究团队将目光投向了卵巢中的"守护者"——颗粒细胞(Granulosa Cells, GCs)。这些环绕卵母细胞的特殊细胞，不仅为卵泡发育提供营养支持，更是激素分泌的关键场所。既往研究表明，Notch信号通路和Wnt/β-catenin通路在GC功能调控中扮演重要角色，但二者在POF中的协同作用机制尚属空白。研究人员创新性地提出科学假设：Notch2可能通过调控Wnt2/β-catenin通路改善GC功能，从而缓解POF。

为验证这一假说，研究团队采用了多层次的实验策略：通过尾静脉注射构建Notch2过表达小鼠模型，腹腔注射环磷酰胺(CY)和白消安(BUS)建立POF动物模型；利用CCK-8法和流式细胞术检测KGN细胞活力和凋亡；采用ELISA和qPCR分析激素水平和基因表达；通过免疫共沉淀(Co-IP)验证Notch2与Wnt2的相互作用；最后使用通路抑制剂IWR-1和激动剂SKL2001进行功能回复实验。

Notch2过表达通过激活Wnt/β-catenin通路改善POF小鼠卵巢功能
研究发现，与对照组相比，POF模型小鼠卵巢显著萎缩，重量减轻约40%。Notch2过表达使血清E₂和AMH水平分别回升62%和55%，同时降低FSH水平33%。HE染色显示Notch2过表达使原始卵泡数量增加2.1倍，闭锁卵泡减少67%。值得注意的是，这些改善效应可被Wnt通路抑制剂IWR-1部分逆转，提示Notch2的作用依赖于Wnt/β-catenin通路激活。

Notch2调控氧化应激和细胞凋亡
在氧化应激指标方面，Notch2过表达使卵巢组织中MDA含量降低42%，GSH和SOD水平分别提高58%和65%。流式细胞术显示Notch2过表达使卵巢细胞凋亡率从28.6%降至12.3%，cleaved-Caspase 3表达减少60%。qPCR分析发现抗凋亡基因Bcl2表达上调3.2倍，而促凋亡基因Bax下调67%。

Notch2与Wnt2存在直接相互作用
免疫共沉淀实验首次证实Notch2与Wnt2在卵巢组织中存在物理结合。Western blot显示Notch2过表达使Wnt2和β-catenin蛋白表达分别增加2.8倍和3.1倍，而通路负调控因子Axin2降低55%。这些分子变化在IWR-1处理组出现显著逆转，证实了Notch2对Wnt通路的上游调控作用。

细胞实验验证调控机制
在KGN细胞模型中，Notch2敲除使CY诱导的细胞活力进一步降低31%，G₁期阻滞加重25%。而Wnt通路激动剂SKL2001可部分挽救这些表型。特别值得注意的是，在Notch2敲除基础上进一步敲除β-catenin，会使细胞凋亡率从35.7%飙升至52.4%，激素分泌功能完全丧失，证实了β-catenin在Notch2下游的关键地位。

这项发表在《Journal of Ovarian Research》的研究具有多重科学价值：首次阐明Notch2-Wnt2/β-catenin轴在POF中的核心调控作用，为理解GC功能维持提供了新视角；证实Notch2过表达可抵抗化疗药物对卵巢的损伤，为开发靶向治疗策略奠定基础；建立的CY/BUS诱导的POF动物模型具有良好的转化医学价值。特别是发现Notch2与Wnt2存在直接相互作用，这为后续开发双靶点干预药物提供了重要依据。未来研究可进一步探索Notch2是否通过磷酸化β-catenin或促进其核转位等机制调控下游通路，这些发现有望为POF患者带来突破性的治疗选择。