CLK抑制剂T-025通过调控SR蛋白功能与RNA剪接抑制三阴性乳腺癌生长与转移

本研究针对三阴性乳腺癌(TNBC)缺乏有效靶向治疗的临床困境，通过新型CLK抑制剂T-025靶向调控SR蛋白磷酸化状态，发现其能诱导SRSF7在核斑累积并限制动态移动性，进而重编程细胞分裂、迁移相关基因的剪接过程。该研究为TNBC提供了基于RNA剪接调控的创新治疗策略，论文发表于《Breast Cancer Research》。

　　

三阴性乳腺癌(TNBC)作为最具侵袭性的乳腺癌亚型，因缺乏雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体2(HER2)表达，导致治疗选择有限且预后较差。尽管化疗仍是主要手段，但耐药性问题日益突出。近年来，RNA剪接异常被证实与肿瘤发生发展密切相关，其中丝氨酸/精氨酸富集(SR)蛋白作为剪接体的核心组分，其功能受CDC2样激酶(CLK)家族调控，成为潜在治疗靶点。荷兰莱顿大学药物研究中心(Leiden Academic Centre for Drug Research, Leiden University)的研究团队通过系统性研究，揭示了新型CLK抑制剂T-025通过改变SRSF7蛋白相互作用网络和亚核定位，显著抑制TNBC细胞增殖和迁移的分子机制，相关成果发表在《Breast Cancer Research》期刊。

研究采用18种TNBC细胞系进行SRB细胞活力检测，结合荧光细胞周期报告系统分析增殖抑制机制；通过活细胞成像和光漂白实验动态追踪SRSF7-GFP的亚核定位；运用深度RNA测序解析差异表达基因(DEGs)和可变剪接事件(ASEs)；采用GFP pull-down/质谱技术绘制SRSF7相互作用组图谱。

研究结果显示，T-025在18种TNBC细胞系中表现出显著抗增殖效果，IC₅₀范围为130.4-1456.0 nM，尤其对高增殖性细胞效果显著。在高度迁移的MDA-MB-231和Hs578T细胞系中，500 nM T-025处理24小时即可使迁移速度降低40-70%。FUCCI报告系统揭示T-025诱导G1-S期阻滞，流式细胞术检测到4N DNA含量细胞比例显著增加。

RNA测序分析发现4179个差异表达基因和超过10万个可变剪接事件。差异基因显著富集于细胞分裂、纺锤体组织等通路，而剪接异常基因主要涉及DNA修复和蛋白磷酸化过程。典型例子包括染色体分离关键基因STAG1/2和着丝粒蛋白CENPE的外显子跳跃事件，以及细胞周期调控因子CDC25家族成员的剪接变异。

GFP pull-down/质谱揭示T-025处理后SRSF7与核斑驻留蛋白(如SRRM2、SRSF2)相互作用增强，而与RNA解旋酶和聚合酶的相互作用减弱。免疫共沉淀证实SRSF7与磷酸化SR蛋白的结合增加，质谱鉴定到135个磷酸位点的上调，涉及SRSF6等多个SR蛋白家族成员。活细胞成像显示T-025处理1小时内即引发SRSF7-GFP在核斑的累积，24小时后核斑数量增加2.5倍，面积扩大3倍。荧光漂白实验证实T-025显著降低SRSF7的动态流动性，核斑区域荧光恢复速率减缓40%。

该研究首次阐明CLK抑制剂T-025通过重构SR蛋白的空间组织模式，导致剪接体招募障碍和全基因组剪接重编程的分子机制。这种"核斑滞留"效应不仅影响细胞周期调控网络的完整性，还破坏了转移相关信号通路的正常剪接，为TNBC提供了双重治疗策略。特别值得注意的是，T-025对高增殖表型细胞的优先抑制作用，与临床TNBC的异质性特征高度契合。研究揭示的SRSF7-TRA2A-SRRM1调控轴，为发展联合治疗方案提供了新靶点。这些发现不仅推进了对剪接调控与肿瘤恶性表型关系的理解，更为开发针对RNA代谢的精准抗癌药物奠定了理论基础。