神经纤毛蛋白-1单克隆抗体对肝癌的差异化抑制作用及其分子机制研究

本研究针对肝癌治疗中血管内皮生长因子(VEGF)通路靶向治疗的局限性，通过自主研发的抗神经纤毛蛋白-1(NRP-1)单克隆抗体A6-11-26，系统探究了其对不同NRP-1表达水平肝癌细胞的差异化抑制作用。研究发现A6-11-26能剂量依赖性地抑制肝癌细胞增殖、迁移并诱导凋亡，其效果与NRP-1表达水平正相关，同时显著下调VEGFR表达，为NRP-1高表达肝癌的精准治疗提供了新策略。

　　

肝癌作为全球癌症相关死亡的第三大病因，在中国更是高居恶性肿瘤致死率的第二位。尽管近年来靶向联合免疫治疗策略取得进展，但患者生存获益仍显有限，这主要源于肿瘤异质性导致的治疗抵抗。其中，血管异常增生是肝癌的典型特征，而血管内皮生长因子(VEGF)通路抑制剂虽已应用于临床，却面临多重耐药机制的挑战。在此背景下，神经纤毛蛋白-1(NRP-1)作为VEGF的共受体，其在不同肿瘤中的过表达与不良预后显著相关，成为突破现有治疗瓶颈的新靶点。

浙江大学医学院附属第一医院核医学科与厦门大学附属中山医院核医学科的研究团队，针对NRP-1在肝癌中的调控机制展开攻关。研究人员采用自主研发的抗NRP-1单克隆抗体A6-11-26，通过体外细胞实验和裸鼠移植瘤模型，系统评估了该抗体对三种不同NRP-1表达水平肝癌细胞系(Bel-7402、SMMC-7721和HepG2)的抑制作用，并深入探究了其对VEGF信号通路的影响。相关成果发表在《Discover Oncology》期刊。

研究主要采用MTT法检测细胞增殖抑制、克隆形成实验评估长期抗肿瘤活性、流式细胞术分析细胞凋亡率，并建立裸鼠移植瘤模型进行体内药效验证。通过免疫组化和Western blot技术检测NRP-1与VEGFR蛋白表达变化，结合qRT-PCR在基因水平验证调控效果。

不同抑制效果
MTT实验显示A6-11-26对三种肝癌细胞的增殖抑制呈剂量和时间依赖性，在400μg/mL剂量作用72小时后，对NRP-1高表达的Bel-7402抑制率达47.56±0.10%，显著高于低表达的HepG2细胞(22.75±0.04%)。克隆形成实验进一步证实，抗体处理组的集落数量和大小均显著减少，且抑制程度与细胞系NRP-1表达水平正相关。

促凋亡作用
流式细胞检测发现，A6-11-26处理48小时可诱导三种细胞发生剂量依赖性凋亡，其中Bel-7402细胞的凋亡率最高。细胞形态学观察显示典型凋亡特征：胞体收缩、表面粗糙并出现颗粒状物质。

体内抑瘤效应
在裸鼠移植瘤模型中，高剂量组(5 mg/kg)的肿瘤生长抑制率显著优于低剂量组(1 mg/kg)，其中Bel-7402瘤体的终末抑制率达58.43%。肿瘤体积变化率(TVR%)分析显示，高剂量组对NRP-1高表达瘤体的抑制效果最为显著。

分子机制
免疫组化和Western blot证实，A6-11-26能剂量依赖性地下调NRP-1和VEGFR表达，且该作用在NRP-1高表达肿瘤组织中更为明显。qRT-PCR显示NRP-1 mRNA水平同步降低，提示抗体可能通过阻断VEGF-NRP-1相互作用，影响VEGFR内化和下游ERK信号通路激活。

该研究首次系统阐明了抗NRP-1单抗A6-11-26对肝癌的差异化抑制作用，证实其疗效与NRP-1表达水平密切相关。通过同时靶向NRP-1和VEGFR双重调控，该抗体克服了单纯抗VEGF治疗的局限性，为NRP-1高表达肝癌患者提供了新的精准治疗选择。特别值得注意的是，研究采用的裸鼠模型显示10-20 mg/kg可能是最佳给药剂量，这为后续临床转化奠定了重要基础。未来研究可进一步探索抗体与其他靶向药物的联合策略，以及放射性核素标记后的诊疗一体化应用前景。