新型抗PEG抗体检测技术的开发及其在生物治疗药物免疫原性研究中的应用

为解决聚乙二醇(PEG)修饰生物治疗药物可能引发的免疫原性问题，Pfizer Inc研究人员开发了首个多重抗PEG抗体夹心免疫检测技术。该研究采用电化学发光(ECL)平台，可同步检测人血清中IgM/IgG/IgE三类抗PEG抗体，灵敏度达25-100 ng/mL，为临床PK/PD研究和安全性评估提供了标准化工具。

　　

在化妆品、清洁剂甚至婴儿湿巾中广泛存在的聚乙二醇(PEG)，如今已成为生物医药领域的关键组分——从延长蛋白质药物半衰期的修饰剂，到mRNA疫苗脂质纳米颗粒(LNP)的立体屏障构成要素。然而这种"安全"聚合物正面临严峻挑战：研究表明约72%人群存在预存抗PEG抗体，这些抗体可能引发药物清除加速、过敏反应甚至影响LNP-mRNA疫苗疗效。更棘手的是，传统检测方法存在三大瓶颈：非特异性干扰严重、IgE检测灵敏度不足、动物源阳性对照不具代表性。

针对这些行业痛点，Pfizer Inc（美国辉瑞公司）的Lisa Dyleski团队在《Journal of Immunological Methods》发表突破性研究。他们创新性地开发出全球首个多重抗PEG抗体电化学发光(ECL)检测平台，通过优化PEG-2000/4000 Da分子偶联化学、引入人源化阳性对照、采用CHAPs去污剂替代Tween等策略，成功实现IgM/IgG/IgE三通道同步检测。关键技术包括：1) 建立人源抗PEG抗体阳性对照库；2) 开发PEG-钌(Ruthenium)复合物标记技术；3) 设计样本预处理方案消除基质干扰；4) 构建多重ECL检测体系。

【关键试剂建立】
研究团队首先筛选获得人源抗PEG IgM/IgG/IgE阳性对照，创造性采用NHS酯化学将PEG与钌标记物偶联，制备出高稳定性检测试剂。相比传统生物素化方法，该策略使信号强度提升3倍。

【检测平台优化】
在MSD（Meso Scale Discovery）平台上，用抗人IgM/IgG/IgE抗体分别包被不同孔道，引入CHAPs缓冲液显著降低背景噪音。针对IgE检测灵敏度低的难题，团队开发分级PEG-BSA-钌复合物，使检测限突破至25 ng/mL。

【特异性验证】
通过添加可溶性PEG竞争实验证实，该平台对PEG表位特异性达98%。在含预存抗PEG抗体的血清样本中，预处理方案成功消除93%的假阳性信号。

这项研究的意义不仅在于技术突破。其建立的标准化流程为行业提供了关键工具：1) 可精准评估PEG化药物临床免疫原性风险；2) 为LNP-mRNA疫苗安全性监测提供解决方案；3) 首次实现IgE介导超敏反应的灵敏检测。正如作者指出，随着PEG在COVID-19疫苗等创新疗法中广泛应用，这种多重检测技术将成为保障患者安全和优化给药方案的重要基石。研究团队特别强调，该方法学框架可扩展至其他聚合物修饰药物的抗体检测，为纳米医药时代的安全评估树立了新标准。