VHL基因修复增强NK细胞浸润与功能：透明细胞肾癌免疫治疗新策略

本研究针对透明细胞肾癌(ccRCC)中VHL基因突变导致的免疫抑制微环境，通过恢复VHL功能揭示了其对NK细胞浸润与活性的调控机制。研究人员利用3D肿瘤球体模型结合定量蛋白质组学，发现VHL修复可降低HIFα依赖性免疫抑制通路，显著提升NK细胞浸润及杀伤效能，为ccRCC的HIF靶向联合免疫治疗提供新依据。

　　

透明细胞肾癌(ccRCC)占肾癌病例的75%，其典型特征是von Hippel-Lindau(VHL)基因突变，导致缺氧诱导因子(HIF)异常稳定，促进肿瘤血管生成和免疫逃逸。尽管ccRCC具有高度免疫细胞浸润特征，但临床数据显示，肿瘤内T细胞的存在反而与不良预后相关，而自然杀伤细胞(NK细胞)的浸润则与患者生存率正相关。这种矛盾现象背后的机制尚不明确，尤其VHL突变如何影响NK细胞功能仍是未解之谜。

为解答这一问题，Karolinska Institutet（卡罗林斯卡学院）的研究团队在《Cancer Immunology, Immunotherapy》发表重要成果。研究人员通过构建VHL修复的ccRCC细胞模型，结合多组学分析和功能性实验，首次系统揭示了VHL-HIFα轴对NK细胞浸润与活性的调控网络。

研究采用三大关键技术：1）建立VHL突变型(786-O)与修复型(pVHL)ccRCC的3D肿瘤球体模型，模拟体内肿瘤微环境；2）通过定量蛋白质组学(TMT标记LC-MS/MS)分析差异表达蛋白；3）利用实时成像、流式细胞术和免疫荧光动态监测NK细胞浸润与杀伤功能。此外，研究还创新性开发了肾脏-肿瘤杂交类器官模型验证临床相关性。

VHL修复显著提升NK细胞浸润
通过荧光示踪与流式分析发现，pVHL肿瘤球体的NK细胞浸润量较VHL突变型增加1.7倍（图1）。共聚焦显微镜显示，CD45⁺NK细胞在pVHL球体中分布更密集（图1C-D）。这种差异与肿瘤缺氧程度相关——pVHL球体中NK细胞的HIF1α表达显著降低（图4C）。

NK细胞表型与功能激活
VHL修复使浸润NK细胞的成熟标志CD57⁺/NKG2A^-/NKp46⁺比例提升（图2B），同时降低PD-1、LAG-3和TIM-3等免疫检查点表达（图2C）。功能上，pVHL浸润NK细胞的颗粒酶B、穿孔素分泌量增加，但增殖标记Ki67降低，表明其抗肿瘤活性增强源于细胞毒性而非数量扩增（图2D）。

HIFα驱动免疫抑制微环境
蛋白质组学揭示VHL突变肿瘤高表达COL6A3、SOD2等促癌蛋白（表1），且分泌GROα、IL-8等细胞因子（图S3C）。qGO分析显示pVHL球体中MHC I类抗原呈递和PD-1信号通路显著下调（图S3B）。值得注意的是，直接抑制HIF1α（KC7F2）或HIF2α（PT2385）均可逆转VHL突变体的NK细胞浸润缺陷（图4D-E）。

临床转化意义
该研究首次阐明VHL-HIFα轴通过多重机制抑制NK细胞功能：1）上调免疫检查点分子；2）改变肿瘤分泌组；3）增强缺氧应激。这为ccRCC的联合治疗提供新思路——近期获批的HIF2α抑制剂Belzutifan与NK细胞疗法联用可能突破当前治疗瓶颈。研究建立的3D-类器官平台也为个性化药物筛选提供了可靠工具。

值得注意的是，VHL修复虽增强NK细胞杀伤，但未完全消除肿瘤，提示需结合其他免疫调节策略。未来研究可进一步探索HIFα下游靶点（如ITPR1）的干预价值，以及组织驻留型NK细胞（CD49a⁺/CD69⁺）在ccRCC中的动态变化规律。