基于多重微滴数字PCR技术的Diego血型分布频率检测及其在西北地区人群中的应用研究

本研究针对Diego血型系统临床检测方法的局限性，开发了多重数字PCR(dPCR)基因分型技术。研究人员通过建立20组50人混合样本库（共1000例），首次实现DIA/DIB等位基因同步检测，发现西安地区Dia/Dib抗原频率分别为7.253%/99.719%，表型分布为Di(a+b-)0.281%、Di(a+b+)6.972%、Di(a-b+)92.747%。该技术为罕见血型筛查提供了高精度、低成本解决方案，对输血安全及人群遗传学研究具有重要意义。

　　

在临床输血医学领域，Diego血型系统因其抗原Dia和Dib引发的溶血性输血反应及新生儿溶血病而备受关注。自1955年委内瑞拉首次报道该血型以来，研究发现其分子基础是SLC4A1基因第2561位T>C突变导致的第854位氨基酸变异（Leu854Pro）。尽管Dia抗原在亚洲人群中出现频率达3-5%，但传统血清学检测面临抗-Dib抗体稀缺、Dib阴性红细胞难以获取等技术瓶颈。

陕西省血液中心（Shaanxi Blood Center）联合西安交通大学化学学院的研究团队创新性地将多重数字PCR技术应用于Diego血型检测。这项发表于《Scientific Reports》的研究通过设计特异性杂交探针（FAM标记Dia探针和VIC标记Dib探针），建立了可同步检测DIA/DIB等位基因的双通道分析体系。研究人员采集1000名献血者样本构建20个混合样本池，采用D-series全自动数字PCR系统进行绝对定量，结合Hardy-Weinberg平衡定律计算群体基因频率。

关键技术包括：1）基于SLC4A1基因exon19序列设计引物探针；2）优化52°C退火温度实现信号簇清晰分离；3）建立混合样本池分析策略（每组50人）；4）应用dPCRAnalyzer软件进行Poisson分布统计分析。

特异性验证
通过Di(a+b-)、Di(a-b+)和Di(a+b+)样本验证显示：单探针检测时FAM/VIC通道信号完全独立（图1），双探针检测无交叉反应（图S1），证实探针特异性达100%。

双通道基因分型
如图2所示，Di(a+b+)样本在FAM和VIC通道均出现阳性微滴，阴性对照组无信号，证明双通道体系可准确区分DIA/DIB/DIA+DIB三种基因型。

人群频率筛查
20个混合样本池检测显示（图3）：Dia抗原频率显著高于欧美人群（7.253% vs 3-5%），Dib阴性个体仅0.281%。表型分布符合Hardy-Weinberg平衡（χ²=1.32, p>0.05），其中Di(a+b+)占比6.972%（表3）。

该研究首次将多重数字PCR技术应用于血型点突变检测，其创新价值体现在：1）单次反应可完成双等位基因分析，成本降低50%；2）混合样本策略使千人规模筛查效率提升20倍；3）为Southeast Asian ovalocytosis（SAO）等Band3蛋白异常疾病提供新的研究工具。正如作者指出，该方法可扩展至Kell、Duffy等稀有血型系统，对完善中国人群血型数据库、预防抗体介导的输血不良反应具有重要临床意义。