甲酸熏蒸灭活临床分离丝状真菌的效能研究：优化方案与形态学影响

本研究通过系统评估甲酸(FA)、甲醛和过氧乙酸对238株临床分离丝状真菌的灭活效果，证实70%甲酸熏蒸12小时可实现100%灭活率，显著优于传统方法。实验揭示甲酸通过破坏孢子细胞壁（电镜显示皱缩、破裂）发挥高效杀菌作用，为实验室真菌安全操作提供新方案。

　　

材料与方法
研究纳入238株临床分离丝状真菌（2022-2023年广东省人民医院收集），涵盖23个物种，包括曲霉属(Aspergillus)100株（烟曲霉ATCC MYA-3626作为标准株）、毛霉目(Mucorales)40株等。通过VITEK MS(v3.2)和ITS测序鉴定菌种。采用沙氏葡萄糖琼脂(SDA)培养，孢子悬液调至1×10⁶ CFU/mL。熏蒸实验在生物安全柜中进行，将500μL甲酸（浓度梯度30%-100%）置于培养皿盖内，密封后28℃孵育（时间梯度4-14小时）。

三种化学剂的灭活率比较
甲酸24小时熏蒸对238株真菌灭活率达99.16%，显著高于甲醛(89.08%)和过氧乙酸(90.35%)（P<0.05）。尤其对镰刀菌(Fusarium)和黑曲霉(A. niger)，甲酸灭活率100%，而甲醛仅72.5%。

甲酸最佳浓度筛选
188株关键菌种的测试显示：30%甲酸灭活率73.9%，50%升至98.4%，70%和100%均达100%。值得注意的是，塔拉马提篮菌(T. marneffei)和黄曲霉(A. flavus)在30%浓度下即可完全灭活，而镰刀菌需50%以上浓度。

时间依赖性效应
70%甲酸熏蒸下，4小时灭活率51.1%，6小时80.9%，12小时实现完全灭活。毛霉目真菌（如冠突耳霉L. corymbifera）4小时即100%灭活，而曲霉属需12小时。

形态学改变
电镜观察显示：甲酸处理后的烟曲霉孢子表面出现不规则褶皱，细胞壁塌陷（图4D）；分生孢子梗萎缩，囊泡结构破坏（图4C）。但48小时培养后的菌落形态保持稳定，便于显微观察，而24小时培养物则出现结构断裂。

讨论
甲酸的强效灭活机制与其低pKa值相关——更高的H⁺和-COO^-浓度导致真菌细胞内脱水。相比甲醛（致癌性）和过氧乙酸（腐蚀性），甲酸更具安全性优势。研究建议针对不同菌属调整熏蒸时间：毛霉目8小时，镰刀菌10小时，曲霉属12小时。

结论
70%甲酸熏蒸12小时可作为临床实验室丝状真菌灭活的黄金标准，其高效性（100%灭活率）、低毒性及对形态观察的低干扰特性，为医院感染防控提供新选择。操作时需注意通风防护，避免吸入高浓度甲酸蒸气。