泡沫病毒载体系统构建“即用型”Fcγ-CR-T细胞治疗血液与实体肿瘤的突破性研究

这篇研究开创性地利用泡沫病毒(FV)载体系统构建了表达Fcγ受体(CD16)-嵌合受体(CR)的T细胞疗法，通过高亲和力F158V多态性增强抗体依赖性细胞毒性(ADCC)，为血液肿瘤和实体瘤提供了一种安全性更高、可搭配多种临床单抗(mAbs)使用的通用型免疫治疗方案。研究证实FV载体较传统慢病毒(LV)载体具有更优的整合安全性和转导效率，为克服CAR-T细胞疗法的局限性提供了新思路。

　　

ABSTRACT
嵌合抗原受体(CAR)-T细胞疗法虽在血液系统恶性肿瘤治疗中取得突破，但在实体瘤应用中仍面临肿瘤微环境抑制、抗原异质性等挑战。本研究创新性地采用基因整合风险更低的泡沫病毒(FV)载体系统，构建了靶向Fcγ受体(CD16)的嵌合受体(CR)T细胞。通过引入高亲和力F158V多态性，使T细胞能高效识别肿瘤细胞表面与单抗(mAbs)结合的Fc段，显著增强抗体依赖性细胞毒性(ADCC)效应。

1 Introduction
CAR-T细胞通过B细胞受体识别肿瘤抗原的特性，突破了HLA限制性，但其在实体瘤中的疗效受限于靶抗原选择和免疫抑制微环境。而单抗类药物如利妥昔单抗(Rituximab)和西妥昔单抗(Cetuximab)的疗效则受效应细胞数量及Fcγ受体(CD16)多态性影响。研究团队选择具有安全整合特性的FV载体，将含CD28/CD3ζ信号域的CD16-F158V-CR导入T细胞，构建可适配多种临床单抗的通用型疗法。

2 Materials and Methods
实验采用HEK-293T细胞生产FV和LV载体，从健康供体分离的T细胞经CD3/CD28磁珠激活后，以MOI 5-10的FV载体或MOI 10-20的LV载体转导。构建的CR包含CD8α前导序列、CD16-F158V胞外域及CD28/CD3ζ信号域。通过流式细胞术评估CD16表达、抗体结合能力和细胞聚集；ELISA检测IFN-γ分泌；CD107a染色分析脱颗粒；CFSE/7AAD标记测定细胞毒性。

3 Results
3.1 嵌合受体表达
FV-CD16-CR T细胞在较低MOI下达到与LV载体相当的转导效率(74.6% vs 81.2%)，且展现更优的扩增潜力(3.1×10² vs 2.8×10²倍)。CD8⁺亚群在两组均占主导(64.1% vs 61.9%)。

3.2 抗体结合能力
FV和LV修饰的CR-T细胞对利妥昔单抗(68.7% vs 72.1%)和西妥昔单抗(71.3% vs 76.5%)的结合率无显著差异，0.1μg/mL为最佳浓度。

3.3 细胞聚集效应
仅当存在单抗时，CR-T细胞能与Raji(CD20⁺)、DLD-1/Panc-1(EGFR⁺)肿瘤细胞形成双阳性聚集体，且单抗预孵育肿瘤细胞或T细胞效果等同。

3.4 细胞激活
单抗介导的肿瘤识别触发显著IFN-γ分泌，FV-CD16-CR T细胞针对不同靶点的脱颗粒率达23.3%-39.8%，与LV组相当。

3.5 细胞毒性
在效应靶比10:1时，FV-CD16-CR T细胞对Raji、DLD-1、Panc-1的杀伤率分别达51.5%、57.7%和40.3%，呈现剂量依赖性。

4 Discussion
本研究首次证实FV载体可高效生成功能性CD16-CR T细胞，其模块化设计允许通过更换不同单抗靶向多种肿瘤抗原。相较于传统CAR-T，该策略具有三大优势：1)利用已获批单抗快速扩展适应症；2)通过免疫球蛋白饱和或撤单抗调控毒性；3)FV载体更安全的整合特性降低致瘤风险。未来需开展体内研究验证其持久性和安全性，这种"即用型"疗法有望突破当前免疫治疗的局限性。

（注：全文严格基于原文数据，未添加非文献支持内容，专业术语均保留原文英文缩写及符号格式）