柴胡三参胶囊通过PI3K/AKT/p53信号通路改善心肌缺血再灌注损伤的潜在活性成分及功能机制研究

这篇研究通过血清药物化学与网络药理学相结合的方法，首次系统解析了柴胡三参胶囊（CHSSC）改善心肌缺血再灌注损伤（MIRI）的物质基础与多靶点作用网络。研究鉴定出106种入血活性成分（包括黄酮类、萜类等），发现其核心靶点TP53、AKT1等通过调控PI3K/AKT/p53通路抑制心肌细胞凋亡和焦亡。实验验证显示CHSSC能显著降低大鼠心肌损伤标志物（cTnI、CK-MB、LDH），并通过激活PI3K/AKT磷酸化、抑制p53磷酸化发挥心脏保护作用。该研究为中药复方治疗MIRI提供了科学依据。

　　

血清药物化学分析揭示CHSSC活性成分

采用超高效液相色谱-质谱联用技术（UHPLC-QE-MS）对柴胡三参胶囊（CHSSC）进行系统性成分分析，共鉴定1587种化合物，其中106种为入血成分，分为原型成分（60种）、代谢增强成分（45种）和代谢产物（1种）。这些成分以黄酮类（如槲皮素）、萜类（如诺比列汀）、生物碱等为主，通过相关性分析发现化合物间存在显著协同作用（如4-甲氧基苯乙酸与AKT1结合能达-9.44 kcal/mol）。

网络药理学构建多靶点作用网络

筛选50个活性成分（OB≥30%，DL≥0.18）预测1220个潜在靶点，与MIRI相关靶点（2979个）交集获得610个关键靶点。蛋白互作网络（PPI）分析显示，TP53、AKT1、STAT3等为核心靶点，涉及p53、PI3K/AKT和MAPK等信号通路。分子对接证实活性成分与靶点强结合（如黄酮类化合物与AKT1结合位点形成稳定氢键）。

体外实验验证抗凋亡与抗焦亡效应

建立氧糖剥夺/复氧（OGD/R）H9C2细胞模型，15% CHSSC含药血清处理可显著降低细胞凋亡率（TUNEL阳性率下降），抑制凋亡蛋白caspase-3/7/8表达；同时减少焦亡标志物caspase-1活化和IL-1β/IL-18释放，其效果与焦亡抑制剂双硫仑（DSF）相当。

动物实验证实PI3K/AKT/p53通路调控机制

大鼠MIRI模型显示，CHSSC中高剂量组（0.43-0.86 g/kg）可降低血清cTnI、CK-MB水平（p<0.01），改善心肌组织病理损伤。Western blot证实其通过上调p-PI3K/PI3K（1.8倍）、p-AKT/AKT（2.1倍）比值，抑制p-p53/p53（0.6倍），进而下调促凋亡蛋白Bax和caspase-3表达。

讨论与展望

研究首次揭示CHSSC通过"多成分-多靶点-多通路"协同作用缓解MIRI，其中PI3K/AKT/p53通路是核心机制。未来需结合表面等离子共振（SPR）等技术直接验证化合物-靶点互作，并探索PANoptosis（凋亡-焦亡-坏死性凋亡交叉对话）在MIRI中的作用。该研究为中药复方系统研究提供了"化学基础-网络预测-实验验证"的范式。