PI、DAPI、Hoechst...谁是最强细胞核"荧光侦探"？

流式迷宫寻真相，荧光镜下追蛛丝——当细胞世界的“谜案”亟待破解，选派哪位“荧光侦探”出马，直接决定您的“证据链”是否可靠！面对PI、7-AAD、Hoechst 33342、DAPI、Fixable Viability Dye 510这五位“探案专家”，摸清各自的核心技能，正是您赢得实验成败的第一步！

本文将为您清晰梳理这五种“探案专家”的【核心技能库】与【专属案件领域】，供您在处理“细胞任务”时精准点兵！

（线人密报：据说还有一位专攻“细胞分身奇案”的追踪大师CFSE…但本次行动档案已满，它的秘密只能留待下次任务揭晓！）

这五位“探案专家”主要服务于两大“细胞任务”：

区分细胞死活 (细胞活力检测)：

目的： 精准识别样本中的死细胞并加以排除，因为它们会产生非特异性结合，干扰后续分析（如抗体染色、功能检测）。这对流式细胞术等实验的准确性至关重要。

适用染料： PI (碘化丙啶)、7-AAD (7-氨基放线菌素D)、Fixable Viability Dye 510 (可固定死活染料510)。

标记细胞核 (核染色)：

目的： 清晰显示细胞核的位置和形态，用于细胞计数、定位（如判断蛋白是否在核内）、细胞周期分析（DNA含量测定）或特殊分选（如侧群细胞SP）。

适用染料： Hoechst 33342、DAPI (4',6-二脒基-2-苯基吲哚)。

“死细胞无处遁形，细胞核清晰现形——在这场细胞世界的‘探案行动’中，PI、7-AAD、FVD 510、Hoechst 33342与DAPI五位‘荧光侦探’各怀绝技！谁是最强王牌？关键要看您交给它们的‘任务档案’！”

PI (碘化丙啶)

主要用途： 死细胞鉴别（细胞活力检测）。

工作原理： 结合核酸（DNA/RNA），但无法进入活细胞，只染膜破损的死细胞。

优点： 经济实惠，信号强，操作简便快速。

关键注意点： 仅适用于新鲜、未固定的细胞样本！ 固定后所有细胞均会被染色，失去区分死活的能力。其发射光谱较宽，在多色流式实验中可能干扰邻近的红色荧光通道（如PE-Cy5）。

7-AAD

主要用途： 死细胞鉴别（细胞活力检测），尤其推荐用于多色流式实验。

工作原理： 与PI类似，结合DNA，不进入活细胞，特异性标记死细胞。

优点： 发射波长比PI更长（~647nm），在流式实验中显著减少与常用荧光素（如FITC, PE, APC）的光谱重叠，兼容性更好，是多色分析的优选死细胞染料。

关键注意点： 同样仅限新鲜未固定样本使用！ 固定后失效。成本通常略高于PI。

Fixable Viability Dye 510 (FVD 510)

主要用途： 死细胞鉴别，且兼容后续固定和透膜操作。

革命性原理： 含有活性基团，能与细胞内的游离氨基共价结合。死细胞因膜破损，染料大量进入胞内结合，信号强；活细胞仅表面少量结合，信号弱。共价键确保染色后固定和透膜处理不会丢失死活信号。

优点： 解决了传统死活染料（PI, 7-AAD）的最大局限，是进行胞内因子（如细胞因子）或核内蛋白（如转录因子）检测实验时，区分死活细胞的金标准。有多种发射波长可选（510nm是常用选项，对应FITC通道），便于多色搭配。

关键注意点： 使用时需要优化浓度和孵育条件。成本相对较高，但对关键实验价值显著。

 

 

以基因生物产品为例看下它的出色表现

Hoechst 33342

主要用途： 细胞核染色。

工作原理： 结合DNA，能够被动扩散进入活细胞进行核染色。

优点： 适用于活细胞核染色，是进行活细胞成像、侧群细胞（SP）分析的标准染料。

关键注意点： 需要紫外光（UV）激发，并非所有流式细胞仪或显微镜都配备相应光源。主要用途是核染色，虽然染色强度可能间接反映细胞状态，但并非专门设计用于精确区分死活。

DAPI

主要用途： 细胞核染色（主要用于固定后的样本）。

工作原理： 高亲和力结合DNA，但不能穿透活细胞的完整细胞膜。

优点： 对固定透膜后的细胞核染色效果极佳，特异性强，背景低，非常稳定且经济。是免疫荧光（IF）、免疫组化（IHC）中最常用的核复染剂。

关键注意点： 必须对细胞进行固定和透膜处理后才能有效染色。同样需要紫外光激发。

如何选择？快速指南

• 快速检测新鲜细胞死活？ 选 PI (经济) 或 7-AAD (多色流式更优)。

• 实验涉及固定/透膜步骤（如胞内染色）？ 必须选 Fixable Viability Dye (如FVD 510)。

• 需要对活细胞进行核染色或分析SP细胞？ 选 Hoechst 33342。

• 对固定后的细胞进行核染色（如免疫荧光）？ DAPI 是最常用、可靠的选择。

基因生物产品列表

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