间充质干细胞凋亡囊泡通过miR-191-5p/CDK6/PDGF-AB轴调控巨噬细胞M2极化改善早发型子痫前期的机制研究

本研究针对早发型子痫前期(EOPE)中巨噬细胞M1/M2极化失衡的关键病理特征，首次揭示间充质干细胞凋亡囊泡(MSC-apoVs)通过递送miR-191-5p下调CDK6蛋白表达，稳定线粒体膜电位(MMP)并促进巨噬细胞M2极化，进而分泌PDGF-AB激活滋养细胞PI3K-AKT-mTOR通路，显著改善EOPE症状。该发现为开发基于凋亡囊泡的EOPE靶向治疗提供了新策略。

　　

在产科领域，早发型子痫前期(EOPE)如同一个潜伏的"妊娠杀手"，其发病机制复杂且缺乏有效治疗手段。中山大学附属第三医院的研究团队在《Stem Cell Research》发表的研究，揭示了这一疾病的突破性治疗靶点。传统观点认为，胎盘滋养细胞侵袭不足是EOPE的核心病理，但最新证据表明，胎盘微环境中巨噬细胞M1/M2极化失衡可能才是点燃炎症风暴的"导火索"。临床数据显示，EOPE患者胎盘M2型巨噬细胞比例显著降低，这种免疫微环境紊乱如何影响疾病进展？能否通过调控巨噬细胞极化逆转病理进程？这些问题成为破解EOPE治疗困境的关键。

研究人员采用单细胞RNA测序、孟德尔随机化分析和多组学技术，首先证实M2巨噬细胞减少与EOPE发病存在因果关系。通过建立L-NAME诱导的EOPE小鼠模型，团队创新性地利用间充质干细胞凋亡囊泡(MSC-apoVs)进行治疗干预。这些直径约180nm的双层膜结构经透射电镜和纳米流式验证，富含CD63/CD9标志物且携带大量功能性miRNA。关键技术包括：从人脐带分离MSCs并诱导凋亡提取apoVs；建立EOPE小鼠模型进行静脉给药；通过流式细胞术分析胎盘免疫细胞亚群；采用Transwell和划痕实验评估滋养细胞迁移能力；结合荧光素酶报告基因验证miR-191-5p与CDK6的靶向关系。

M2巨噬细胞比例在人类EOPE胎盘中降低
单细胞测序分析显示EOPE胎盘M2巨噬细胞占比显著低于正常妊娠(下降约40%)，孟德尔随机化证实M2相关基因与EOPE呈负相关。免疫组化验证CD206⁺ M2巨噬细胞在EOPE组减少2.3倍，而CD86⁺ M1亚群无显著变化。

MSC-apoVs的提取与表征
STS诱导的MSCs产生典型凋亡特征(核碎裂、TUNEL阳性)，apoVs经鉴定含凋亡标志物cleaved caspase-3，粒径分布180±25nm，浓度达10¹¹ particles/mL，miRNA测序发现miR-191-5p在apoVs中富集度较母细胞高4.8倍。

MSC-apoVs促进巨噬细胞M2极化
PKH26标记示踪显示apoVs可被巨噬细胞高效内化，使CD206⁺ M2比例提升2.1倍。机制上，miR-191-5p通过结合CDK6 3'UTR(荧光素酶活性降低63%)，下调CDK6蛋白表达，使线粒体膜电位(JC-1红绿比提高1.8倍)和ATP产量增加，驱动M2极化。

动物模型验证治疗效果
EOPE小鼠经apoVs治疗后，收缩压降低28mmHg，尿蛋白减少62%，胚胎存活率提高3.2倍。胎盘免疫细胞分析显示CD206⁺ M2巨噬细胞比例恢复至正常水平85%，且滋养细胞(CK7⁺)向蜕膜侵袭深度增加2.5倍。过表达miR-191-5p的apoVs疗效更显著，而抑制剂处理组效果减弱50%。

PDGF-AB/PI3K-AKT-mTOR通路激活
M2巨噬细胞分泌PDGF-AB增加3.5倍，通过结合滋养细胞PDGFR-β受体，激活PI3K(磷酸化水平提高2.1倍)-AKT-mTOR信号轴，中和抗体处理使滋养细胞侵袭能力降低72%。

这项研究首次阐明MSC-apoVs通过miR-191-5p/CDK6/PDGF-AB轴调控巨噬细胞极化的分子机制，不仅为EOPE提供了新型治疗策略，更开创了凋亡囊泡调控免疫微环境的先例。临床转化方面，基于miR-191-5p的apoVs制剂具有穿越胎盘屏障、无免疫排斥等优势，其"双管齐下"的作用模式——既纠正免疫失衡又促进组织修复，为攻克其他妊娠相关免疫疾病提供了范式。该发现同时拓展了对细胞凋亡生物学功能的认识，揭示凋亡细胞可通过囊泡传递"修复指令"，这一发现可能引领再生医学新方向。