ZFP36L1/L2作为新型抗病毒因子通过结合克里米亚-刚果出血热病毒核蛋白发挥作用的机制研究

本研究揭示了蛋白二硫键异构酶(Pdi1p)在裂殖酵母(S. pombe)中作为外源蛋白分泌载体的创新应用。作者通过构建Pdi1p-EGFP融合蛋白，在蛋白酶缺陷型A8菌株(h- leu1-32 ura4-C190T Δpsp3等)中实现高效分泌，并鉴定出C端x结构域对分泌效率的关键作用，为真核蛋白生产提供了新策略。

　　

亮点章节

菌株与培养
使用的裂殖酵母菌株为A8（h^- leu1-32 ura4-C190T Δpsp3, Δisp6等，8个蛋白酶基因被敲除）。培养采用酵母提取物培养基（YES；含0.5%酵母膏、3%葡萄糖和SP补充剂）或最小培养基（MM；3g/L基础成分）。

Pdi1p-EGFP融合蛋白在A8菌株中的分泌
为探究Pdi1p作为分泌载体的能力，研究者构建了由强启动子hCMV-p驱动的染色体整合型多拷贝载体。将线性化的载体转入A8菌株后，通过检测24-60小时培养上清发现，融合蛋白实现了高效分泌。

讨论
目前利用重组技术生产外源蛋白的宿主包括大肠杆菌(E. coli)、酵母和枯草芽孢杆菌(B. subtilis)等。裂殖酵母(S. pombe)因其具有与高等真核生物相似的转录和翻译后修饰途径，能保持真核蛋白天然构象而备受青睐。本研究通过优化Pdi1p载体设计，建立了高效的真核蛋白分泌系统。