基于捕获抗体与检测抗体定向策略提升大肠杆菌O157:H7侧流免疫检测灵敏度

本研究创新性地采用重组蛋白A（rPA）单体和二聚体分别实现检测抗体与荧光微球的定向偶联（90.9%取向率）及捕获抗体在NC膜上的三维定向固定，构建了双抗体定向的侧流免疫检测（LFIA）体系。该技术使大肠杆菌O157:H7检测限降至2.21×102 CFU/mL（灵敏度提升9.3倍），线性范围达5×102-1×105 CFU/mL，为食品安全现场检测提供了新方案。

　　

亮点
本研究突破传统侧流免疫检测（LFIA）中抗体非定向固定的局限，通过重组蛋白A（rPA）单体和二聚体的协同作用，首次实现捕获抗体与检测抗体的同步定向优化，为病原体检测领域树立了新标杆。

材料与设备
实验采用大肠杆菌O157:H7（ATCC43888）标准菌株及配套抗体，关键试剂包括：含半胱氨酸标签的重组蛋白A（rPA）、抗大肠杆菌O157:H7单克隆抗体（mAb）、Alexa Fluor? 647标记的Fab片段二抗等。聚集诱导发光荧光微球（AIEFM）因其抗淬灭特性被选为信号载体。

原理阐释
如图1所示：（a）rPA-二聚体像"分子支架"般固定捕获抗体，使其Fab片段如"触手"外伸形成三维捕获网络；（b）AIEFM通过rPA-单体实现抗体"倒刺式"定向偶联，相比传统EDC/NHS随机偶联法，抗原结合位点利用率提升61.7%。这种"双保险"定向策略使检测限突破至百菌量级。

结论
该研究开创性地将rPA二聚体"锚定"技术与单体导向探针相结合，使LFIA对大肠杆菌O157:H7的检测灵敏度接近PCR水平（2.21×10² CFU/mL），在牛奶样本验证中展现出卓越的现场应用潜力，为食源性致病菌监测提供了新一代技术范式。