胆固醇富集脂筏介导内吞作用：呼吸道合胞病毒(RSV)跨宿主细胞入侵的通用机制与治疗新策略

本研究揭示了胆固醇富集脂筏（lipid rafts）介导的内吞作用是呼吸道合胞病毒（RSV）不同基因型（A2/B18537/ON1）入侵多种宿主细胞（HEp-2/A549/HBEC）的共性通路。通过单颗粒追踪和共聚焦显微技术，证实病毒通过招募核仁素（NCL）和胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）至脂筏，诱导肌动蛋白重排及内体形成。靶向胆固醇合成的辛伐他汀（simvastatin）与病毒融合蛋白抑制剂AK0529联用，在体外和体内（BALB/c小鼠模型）均展现协同抗病毒效应，为RSV感染治疗提供新思路。

　　

胆固醇富集脂筏介导的RSV入侵机制
呼吸道合胞病毒（RSV）作为婴幼儿严重毛细支气管炎和肺炎的主要病原体，其入侵宿主细胞的机制存在显著异质性。最新研究发现，尽管不同RSV基因型（如A2、B18537和当前流行株ON1）可通过多种途径感染HEp-2、A549和原代人支气管上皮细胞（HBEC），但胆固醇富集脂筏（lipid rafts）介导的内吞作用被证实为跨细胞类型的共性通路。甲基-β-环糊精（MβCD）对脂筏的破坏实验显示，该途径对病毒入侵具有决定性作用——当使用10 mM MβCD处理时，所有测试毒株的感染均被完全阻断。

动态追踪病毒入侵过程
通过DiD荧光标记病毒颗粒的实时成像技术，观察到RSV颗粒与脂筏标志物霍乱毒素B亚基（CT-B）及胆固醇探针NBD在细胞膜上的共定位。病毒进入后呈现双向或静态运动轨迹，并在90分钟内与早期内体标志物EEA1（51.05%共定位率）和晚期内体标志物Rab7（30.3%）发生显著共定位。肌动蛋白（actin）重排分析显示，RSV感染诱导HEp-2细胞中49.13%的病毒信号与肌动蛋白-脂筏复合物共定位，证实了细胞骨架重构在病毒内化中的关键作用。

受体招募与信号通路调控
Western blot和共聚焦显微镜分析揭示，RSV感染促使核仁素（NCL）从核内迁移至膜脂筏，同时胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）在脂筏中的聚集增加77.82%。基因操作实验表明，过表达NCL或IGF1R可使RSV A2感染率提升2.1倍，而siRNA敲降则使感染率降低60%。值得注意的是，即使受体表达恢复，MβCD对脂筏的破坏仍能抑制病毒入侵，说明胆固醇微环境对受体功能的调控具有决定性影响。

胆固醇代谢的靶向干预
针对胆固醇合成限速酶HMGCR和角鲨烯环氧化酶（SQLE）的抑制剂辛伐他汀（EC₅₀=2.0 μM）和特比萘芬（EC₅₀=53.3 μM）在感染早期（0-6小时）表现出显著抗病毒活性。机制研究表明，这些药物通过降低膜胆固醇含量（荧光强度减少85%），破坏脂筏结构从而阻断病毒内化。

协同治疗策略的创新突破
在BALB/c小鼠模型中，低剂量联用方案（12.5 mpk AK0529+12.5 mpk辛伐他汀）使肺组织病毒载量下降至检测限以下，病理评分较单药治疗组降低3.2倍。体外协同指数分析（ZIP模型）显示，该组合对RSV B18537的协同得分为3.24，证实其具有临床转化潜力。

这项研究不仅阐明了RSV入侵的保守机制，更开创性地提出"病毒-宿主双靶点"治疗策略——通过同时抑制病毒融合蛋白（AK0529）和宿主胆固醇合成（辛伐他汀），为应对RSV感染的临床挑战提供了全新解决方案。