EPHX1通过激活JAK/STAT通路增强肝癌细胞对瑞戈非尼的耐药性：机制解析与临床意义

本研究揭示了微体环氧化物水解酶1（EPHX1）在肝细胞癌（HCC）中通过激活JAK/STAT信号通路介导瑞戈非尼耐药的关键机制。研究人员通过临床样本分析、细胞模型构建及动物实验证实，EPHX1过表达显著降低瑞戈非尼对HCC细胞的增殖抑制和促凋亡作用，而JAK/STAT抑制剂HY-N1447可逆转此耐药效应，为克服晚期HCC二线治疗耐药提供新靶点。

肝癌是全球第六大高发恶性肿瘤，每年导致约75万人死亡，其中肝细胞癌（HCC）占比高达90%。尽管瑞戈非尼（Regorafenib）作为晚期HCC标准二线治疗能延长患者生存期，但耐药问题严重制约其疗效。微体环氧化物水解酶1（EPHX1）作为药物代谢关键酶，其多态性已被证实与多种癌症相关，但在HCC耐药中的作用机制尚未阐明。大连医科大学附属第二医院的研究团队通过系统研究，首次揭示了EPHX1-JAK/STAT轴在瑞戈非尼耐药中的核心作用。

研究人员采用多组学技术开展研究：通过生物信息学分析发现EPHX1在HCC组织高表达；利用15对临床样本进行Western blot验证；构建EPHX1过表达/敲除的SNU449和Huh7细胞模型；采用CCK-8、流式细胞术和克隆形成实验评估药物敏感性；通过裸鼠移植瘤模型验证体内效果；结合RNA测序（DGE-seq）和KEGG通路分析筛选关键信号通路；最后使用JAK/STAT抑制剂HY-N1447进行功能挽救实验。

EPHX1在HCC组织中显著上调

临床样本分析显示，EPHX1在HCC组织的mRNA和蛋白水平均显著高于癌旁组织（图1C-F）。Western blot检测15对样本证实EPHX1蛋白在所有癌组织中过表达，免疫组化显示其定位于细胞质且肿瘤区域染色更强。

EPHX1介导瑞戈非尼耐药

细胞实验发现，EPHX1过表达使SNU449和Huh7细胞的瑞戈非尼IC₅₀值分别升高40%和35%（图2A），而敲除后药物敏感性增强。流式细胞术显示EPHX1可拮抗瑞戈非尼诱导的S期阻滞（图2B-E），CCK-8和克隆形成实验证实其维持癌细胞增殖能力（图2F-H）。Western blot检测增殖标志物PCNA表达变化与表型一致（图2I-J）。

EPHX1抑制药物诱导的凋亡

Annexin V检测显示EPHX1过表达使瑞戈非尼诱导的凋亡率降低2.3倍（图3A-D）。分子机制上，EPHX1逆转了瑞戈非尼对Bcl-2（下调）、Bax和cleaved Caspase-3（上调）的调控作用（图3E-H）。动物实验进一步证实，EPHX1敲除组肿瘤体积较对照组减少58%（图4G-H），且联合瑞戈非尼呈现协同抑瘤效果。

JAK/STAT通路的关键作用

RNA测序分析发现，EPHX1敲除后JAK/STAT通路基因显著差异表达（图5C）。Western blot证实EPHX1过表达激活JAK1/JAK2/STAT3磷酸化（图6A-D），而HY-N1447处理可逆转这种激活，并恢复细胞对瑞戈非尼的敏感性（图7）。机制上，EPHX1可能通过干扰素（IFN）信号间接调控JAK/STAT，形成"EPHX1-IFN-JAK/STAT"正反馈环路。

该研究首次阐明EPHX1通过激活JAK/STAT通路促进HCC耐药的分子机制，为克服临床耐药提供两方面重要启示：一是EPHX1可作为预测瑞戈非尼疗效的生物标志物，其表达水平可能指导个体化用药；二是联合JAK/STAT抑制剂（如HY-N1447）可望成为逆转耐药的新策略。值得注意的是，EPHX1基因多态性（如Tyr113His和His139Arg）可能影响药物代谢，这为后续研究开辟了新方向。研究成果不仅深化了对HCC耐药机制的理解，更为开发靶向EPHX1的联合治疗方案奠定理论基础。