离心富集技术提升鸡肉冲洗液中弯曲菌检测灵敏度的验证研究

为解决新西兰家禽中弯曲菌(Campylobacter)低浓度样本检测难题，研究人员开发了基于相对离心力(RCF)的富集方法。该研究通过优化离心参数(4430×g,30分钟)，使检测限降至28 CFU/400ml，较现行NMD方法灵敏度提升7倍，对商业样本检出率提高至29.8%，为食源性弯曲菌病的防控提供了更精准的技术支持。

　　

弯曲菌病(Campylobacteriosis)是新西兰通报率最高的食源性疾病，其中84%病例与家禽相关。尽管2006-2008年实施的防控措施使病例数下降50%，但近年发病率下降趋缓。现行国家微生物数据库(NMD)采用的直接涂布法检测限为200 CFU/400ml冲洗液，难以评估家禽加工卫生水平的持续改进。新西兰食品安全局(NZFS)在《弯曲菌行动计划》中提出到2024年将发病率降至70/10万的目标，亟需更灵敏的检测方法。

新西兰公共卫生与法医科学研究所(New Zealand Institute for Public Health and Forensic Science)的研究团队开发了基于相对离心力(RCF)的富集方法。通过离心浓缩冲洗液中的弯曲菌，显著提升检测灵敏度。研究采用单实验室验证和商业实验室对比实验，评估了12株弯曲菌(含参考菌株和禽源分离株)在不同接种浓度下的回收率。关键技术包括：离心参数优化(3500-4430×g，15/30分钟)、人工污染样本制备、mCCDA平板计数、需氧菌落计数(APC)以及统计分析方法(ANOVA、Tukey检验)。

3.1 离心参数优化

比较不同RCF(3500/4000/4430×g)和时间(15/30分钟)对C. jejuni ATCC 33560和C. coli ATCC 33559回收率的影响。30分钟离心显著优于15分钟(p<0.001)，但不同RCF间无差异(p=0.992)。最终选定4430×g离心30分钟，此时C. jejuni在沉淀组分中回收率达429.0 CFU/2ml。

3.2 方法验证

RCF方法检测限为28 CFU/400ml，较NMD方法(200 CFU/400ml)降低7倍。对126份人工污染样本的检测显示，RCF方法阳性率(73.8%)显著高于NMD方法(51.6%)(p<0.001)。高浓度样本(45 CFU/ml)中，RCF方法平均回收CFU为NMD方法的6.7倍。

3.3 商业样本检测

863份商业鸡肉冲洗液中，RCF方法检出率(29.8%)是NMD方法(13.2%)的2.3倍(p<0.001)。两种方法对>6000 CFU/400ml的高污染样本检出结果一致，但RCF方法额外检出155份低浓度阳性样本(88.4%含1-7 CFU/2ml)。

该研究证实RCF方法能有效富集禽肉冲洗液中的弯曲菌，沉淀组分平均回收率达70.3%。方法改进支持了新西兰弯曲菌防控目标的实现，为评估加工卫生改进提供了更精准的工具。特别值得注意的是，该方法对C. jejuni和C. coli等主要致病菌株均表现良好，且适用于商业实验室的常规检测。研究结果已应用于新西兰家禽行业监管，通过提升低水平污染的检出能力，为食品安全风险管理提供了重要技术支撑。