基于反相高效液相色谱法的大鼠血浆中PI3Kδ抑制剂leniolisib生物分析方法开发与药代动力学应用研究

研究人员针对PI3Kδ抑制剂leniolisib在治疗免疫缺陷疾病中的临床需求，开发了一种快速、灵敏的RP-HPLC生物分析方法。该方法采用蛋白沉淀前处理技术，以sorafenib为内标，在150-6000 ng/mL范围内线性良好（R2>0.999），准确度达89.82-96.03%，成功应用于大鼠药代动力学研究，为药物生物利用度研究提供了可靠分析工具。

　　

在免疫治疗领域，原发性免疫缺陷病（Primary immunodeficiency disorders, PIDs）中的活化PI3Kδ综合征（Activated PI3K delta syndrome, APDS）因其独特的病理机制备受关注。这类疾病由PIK3CD或PIK3R1基因突变引发，导致淋巴细胞功能紊乱，临床表现为反复感染、淋巴组织增生甚至恶性肿瘤。尽管现有治疗手段如抗生素预防和造血干细胞移植（HSCT）有一定效果，但存在明显局限性。近年来，口服选择性PI3Kδ抑制剂leniolisib的研发为APDS患者带来新希望，该药物已于2023年获FDA批准上市。然而，缺乏灵敏可靠的生物分析方法制约着其药代动力学研究的深入开展。

印度海得拉巴RBVRR女子药学院（RBVRR Women's College of Pharmacy）和斯里帕德玛瓦蒂女子大学药物技术研究所（Institute of Pharmaceutical Technology, Sri Padmavati Mahila Visvavidyalayam）的研究团队在《Future Journal of Pharmaceutical Sciences》发表研究，建立了基于RP-HPLC的leniolisib定量分析方法。该方法采用Inertsil ODS-4 C₁₈色谱柱（150×4.6 mm，3 μm），以乙腈-磷酸盐缓冲液（pH 7.4，40:60）为流动相，流速1 mL/min，检测波长294 nm，内标选用结构相似的sorafenib。通过系统的方法学验证和实际应用，证实该方法能满足生物样本分析要求。

关键技术包括：1）采用蛋白沉淀法处理Wistar大鼠血浆样本；2）建立7点校准曲线（150-6000 ng/mL）；3）通过3天连续检测验证批间精密度（CV<6%）；4）考察冻融、短期、长期及进样器稳定性；5）应用于10 mg/kg剂量口服溶液给药后的药时曲线测定。

方法优化

通过考察不同色谱条件，最终确定在2.186 min（leniolisib）和3.005 min（sorafenib）处获得最佳分离效果。紫外光谱分析显示294 nm为最佳检测波长，兼顾两者吸收特性。

方法验证

选择性实验证实空白血浆无干扰（图5），基质效应测试显示回收率稳定在95.43-95.98%（表4）。线性范围覆盖三个数量级（R²=0.999），LLOQ达150 ng/mL。稳定性测试表明样本在-20°C可保存28天（表5）。

药代动力学应用

单次给药（10 mg/kg）后，leniolisib的C_max为4606.08 ng/mL（2 h达峰），t_1/2约2.14 h（图8）。与FDA公布的片剂数据相比，溶液剂型显示更长的T_max和t_1/2（表6），提示剂型差异可能影响吸收速率。

该研究建立的HPLC方法具有操作简便、分析快速（5 min/样）、成本低廉等优势，首次实现大鼠血浆中leniolisib的准确定量。相较于既往代谢研究采用的¹⁹F-NMR等技术，更适合常规实验室开展药物监测。研究结果为后续生物等效性评价奠定了基础，也为PI3Kδ抑制剂类药物的分析方法开发提供了参考范式。值得注意的是，动物与人体生理差异可能导致药动学参数偏移，未来需在临床样本中进一步验证方法的适用性。