piRNA hsa_piR_018849通过调控CCN5 mRNA稳定性促进骨肉瘤细胞增殖与侵袭的机制研究

本研究针对骨肉瘤（Osteosarcoma）治疗中存在的增殖失控和转移难题，通过小RNA测序技术鉴定出关键piRNA分子hsa_piR_018849。研究人员发现该分子通过结合CCN5 mRNA编码区降低其稳定性，从而促进肿瘤细胞增殖、迁移并抑制凋亡。这一发现为骨肉瘤靶向治疗提供了新策略，相关成果发表于《Journal of Orthopaedic Surgery and Research》。

　　

骨肉瘤作为青少年最常见的恶性骨肿瘤，其高转移性和化疗耐药性一直是临床治疗的痛点。尽管手术联合化疗提高了生存率，但五年生存率仍停滞在60%-70%。近年来，非编码RNA的调控作用成为研究热点，其中piRNA（Piwi-interacting RNAs）作为一类24-31nt的小RNA，在肿瘤中的功能尚待深入探索。南通大学附属医院脊柱外科和南通大学脊柱脊髓疾病研究所的研究团队通过前沿测序技术，首次揭示了piRNA hsa_piR_018849在骨肉瘤中的促癌机制。

研究团队采用多组学联用策略：通过小RNA测序筛选MG63骨肉瘤细胞差异表达piRNA；qPCR验证临床样本表达谱；CCK-8和Transwell实验评估细胞功能；RNA pull-down和荧光素酶报告基因明确分子互作；建立小鼠异种移植模型验证体内效果。关键技术包括：20例配对骨肉瘤组织测序、双荧光素酶报告系统、RNA稳定性检测（放线菌素D处理）等。

主要研究发现

1. hsa_piR_018849在骨肉瘤中高表达

   测序显示该piRNA在MG63细胞中较骨髓基质干细胞（BMSCs）上调4.3倍（p<0.01），临床样本验证显示肿瘤组织表达量较癌旁高2.8倍（p<0.05）。

2. 功能获得与缺失实验证实促癌作用

   过表达hsa_piR_018849使MG63细胞增殖率提高47%（CCK-8），克隆形成数增加2.1倍；Transwell显示侵袭细胞数提升3.2倍（p<0.01）。而抑制剂处理使U2OS细胞凋亡率升高至28.6%（vs对照组11.3%）。

3. 体内实验验证促增殖效应

   小鼠模型显示过表达组肿瘤重量达1.52±0.21g，较对照组（0.83±0.15g）显著增加（p<0.01），

   
   。

4. CCN5是关键下游靶点

   RNA-seq发现389个差异基因，KEGG富集显示代谢通路改变。机制上，hsa_piR_018849结合CCN5 mRNA的CDS区（结合位点：5'-UGCUGA-3'），使其半衰期从6.2h缩短至3.1h（p<0.01），

   
   。

研究意义

该研究首次阐明piRNA-CCN5轴在骨肉瘤中的调控机制：hsa_piR_018849通过降低肿瘤抑制因子CCN5的mRNA稳定性，激活胆固醇合成等代谢通路（GO分析显示p=3.2×10^-4），最终促进恶性进展。这不仅为骨肉瘤诊断提供了潜在分子标志物，更为开发基于piRNA拮抗剂的靶向疗法奠定理论基础。通讯作者Zhiming Cui和Jiajia Chen指出，针对该通路的纳米药物递送系统将是未来研究方向。