商业与实验室自建分子检测方法在肠道原虫诊断中的性能比较研究

本研究针对肠道原虫感染诊断的敏感性不足问题，由意大利多中心团队对比了商业RT-PCR试剂盒(AusDiagnostics)与实验室自建PCR方法在检测贾第鞭毛虫(Giardia duodenalis)、隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)等病原体中的表现。结果显示分子检测对固定粪便样本的检出率优于新鲜样本，为优化寄生虫诊断流程提供了重要依据。

　　

肠道原虫感染是全球腹泻疾病的主要病因之一，每年影响约35亿人。传统显微镜检测虽为金标准，但存在灵敏度低、依赖操作者经验等局限，尤其难以区分形态相似的原虫物种（如非致病性内阿米巴与致病的溶组织内阿米巴）。随着分子诊断技术的发展，实时荧光PCR(RT-PCR)因其高灵敏度在低流行区显现优势，但寄生虫细胞壁结构导致的DNA提取难题仍是技术瓶颈。

意大利帕多瓦大学医院微生物与病毒学部门的研究团队联合18家实验室开展多中心研究，比较了商业RT-PCR试剂盒(AusDiagnostics)与实验室自建方法的诊断效能。研究纳入355份粪便样本（230份新鲜样本和125份保存样本），通过显微镜检查、商业试剂盒和自建PCR同步检测贾第鞭毛虫(G. duodenalis)、隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)等四种病原体。

关键技术包括：1) 使用MagNA Pure 96系统自动化提取DNA；2) 商业试剂盒靶向18S rRNA(贾第鞭毛虫)和COWP基因(隐孢子虫)；3) 自建PCR采用TaqMan探针检测寄生虫特异性基因；4) 通过Cohen's kappa检验评估方法一致性。

主要结果

1. 贾第鞭毛虫检测：商业试剂盒与自建PCR灵敏度分别达91%和93.3%，对固定样本的检出一致性更高（κ>0.9）。

2. 隐孢子虫检测：两种分子方法灵敏度均为78.9%，但固定样本检出率达100%，提示DNA保存质量影响结果。

3. 脆弱双核阿米巴检测：分子方法灵敏度仅68.4%，可能与虫体DNA易降解有关。

4. 溶组织内阿米巴鉴别：显微镜无法区分E. histolytica/E. dispar，而自建PCR成功鉴定4例致病株。

结论与意义

该研究证实分子检测尤其适用于固定粪便样本中贾第鞭毛虫和隐孢子虫的筛查，其性能超越传统显微镜。然而，DNA提取标准化仍是提升脆弱双核阿米巴检出率的关键。研究成果为临床实验室选择诊断方案提供实证依据，推动寄生虫检测从经验依赖型向标准化分子检测转型。论文发表于《Parasites》期刊，为优化全球寄生虫病诊断流程贡献重要数据。