长期冷冻保存对犬血浆中抗婴儿利什曼原虫抗体稳定性的影响评估：IFAT检测的可靠性研究

本研究针对长期冷冻保存对犬抗婴儿利什曼原虫(Leishmania infantum)抗体稳定性的影响展开，通过免疫荧光抗体试验(IFAT)对5年、10年及20年冻存样本进行复测。结果显示，-20°C保存条件下定性结果一致性达92.1%，定量结果呈强相关性(rs>0.92)，证实冷冻保存适用于临床回顾性诊断及流行病学研究。

　　

在人与动物共患疾病中，由婴儿利什曼原虫(Leishmania infantum)引起的利什曼病始终是地中海地区的重要公共卫生问题。作为主要储存宿主的犬类，其感染状况监测对疾病防控至关重要。然而，一个长期困扰研究人员的难题是：冷冻保存的血清样本能否用于追溯性研究？抗体滴度会随时间衰减吗？西班牙马德里康普顿斯大学兽医学院(Complutense University of Madrid)的Patricia Olmeda团队在《Parasites》发表的研究，为这个争议性问题提供了令人信服的答案。

传统诊断依赖免疫荧光抗体试验(IFAT)检测抗L. infantum IgG抗体，其滴度高低直接影响临床决策。但样本采集与检测往往存在时间差，特别是大规模流行病学调查时，样本可能需冻存数年。虽然-20°C保存是常规做法，但抗体在长期冷冻中是否稳定，既往缺乏系统研究。这项历时20年的追踪实验，首次揭示了抗体稳定性的"时间密码"。

研究人员采用队列研究设计，从冷冻血浆库中选取189份样本，按冻存时长分为5年(G5)、10年(G10)和20年(G20)三组，每组63份涵盖全滴度范围(阴性至1/6400)。通过严格匹配的IFAT检测流程，使用相同抗原(L. infantum L-75株)、仪器(Olympus BH-2?荧光显微镜)和判读标准，比较冻存前后结果差异。

主要研究发现

定性稳定性

总体定性符合率达92.1%，但20年组出现显著"阴性漂移"：阴性样本比例从28.6%升至39.7%(P=0.0082)。5年与10年组则保持稳定，提示抗体降解可能始于10-20年间。

定量相关性

如图1所示，所有组别均显示极强定量相关性(rs>0.93，P<0.001)。尽管20年组中位滴度从1/200降至1/100(P<0.001)，但86.2%样本符合"可接受差异"标准(≤1个滴度差异)。

时间梯度效应

10年组表现最优，定量符合率55.6%显著高于20年组(42.9%)；5年组(47.6%)与20年组无统计学差异。这种非线性变化提示抗体稳定性并非简单随时间线性衰减。

结论与意义

该研究证实-20°C冷冻可有效保存抗L. infantum IgG抗体长达20年，定性结果可靠性尤其突出。虽然20年样本可能出现轻微滴度下降，但临床诊断最关注的阳性/阴性判断基本不受影响。这一发现为三类重要应用铺平道路：

1. 临床追溯诊断：使利用历史冻存样本评估感染史成为可能

2. 研究设计优化：支持长期纵向研究中的样本分期检测

3. 生物样本库建设：为建立标准化冷冻 protocols 提供依据

值得注意的是，研究同时揭示了IFAT技术的固有局限性——即使新鲜样本也存在48.7%的定量波动，这提示临床解读时需结合临床表现综合判断。正如作者强调的，当滴度变化≤1个梯度时，更可能反映检测变异而非真实生物学变化。

这项研究为热带病血清学研究树立了新标杆，其创新性在于首次系统评估了冷冻时间跨度与抗体稳定性的剂量-效应关系。未来研究可进一步探索-80°C超低温保存的效果，以及不同病原体抗体的降解动力学差异。随着样本库在精准医学中的重要性日益凸显，这类基础性研究价值将持续放大。