基因治疗新突破：低免疫原性AAV载体VNX-101实现CD19靶向T细胞衔接器的长效表达

本研究针对CD19+ B细胞恶性肿瘤治疗中现有免疫疗法（如CAR-T和blinatumomab）的局限性，开发了基于重组腺相关病毒（AAV）的基因治疗载体VNX-101。通过分子改造降低免疫原性并优化表达效率，单次给药即可在体内持续分泌双特异性抗体GP101（模拟blinatumomab功能），临床前研究显示其能有效清除肿瘤且安全性良好，为"即用型"癌症免疫治疗提供新策略。

　　

在癌症免疫治疗领域，CD19靶向疗法如CAR-T细胞和双特异性抗体blinatumomab虽取得突破，但仍面临持久性不足、给药繁琐等挑战。CAR-T需要个体化制备，而blinatumomab需连续静脉输注数周，患者依从性差。更关键的是，这些疗法难以维持长期抗肿瘤压力，导致复发风险。如何开发兼具"即用型"便利性和长效作用的治疗手段，成为亟待解决的临床难题。

美国全国儿童医院阿比盖尔韦克斯纳研究所（Nationwide Children's Hospital, Abigail Wexner Research Institute）联合Vironexis Biotherapeutics等机构的研究团队，在《Molecular Therapy Methods》发表最新成果。研究人员通过改造腺相关病毒（AAV）载体，开发出临床级候选药物VNX-101，其能在单次给药后实现CD19xCD3双特异性抗体GP101的持续分泌。该研究通过分子优化（去除6xHis标签、修饰WPRE元件、消除CpG序列等）增强安全性，并采用强效CAG启动子提升表达效率。动物实验证实，VNX-101可在人源化小鼠模型中清除B细胞肿瘤，且猴类毒性试验显示良好耐受性，为首次人体试验奠定基础。

关键技术方法包括：1）分子改造构建含不同启动子（CAG/LP1/EFS）的AAV载体；2）体外转染原代肝细胞评估GP101表达；3）建立CD19⁺ Raji/Tanoue白血病小鼠模型，联合人外周血单核细胞（huPBMCs）验证疗效；4）采用ELISA和数字PCR（ddPCR）分析药代动力学与生物分布；5）在食蟹猴中完成12周GLP毒理研究。

设计并筛选临床转化候选载体
通过系统比较不同载体构型，发现AAVrh74CAG193-dCG-MRE在肝细胞中的GP101表达量最高（较肝特异性启动子LP1高2倍），小鼠血清水平达其他载体的10倍。功能实验证实GP101与blinatumomab的EC₅₀相当（0.049 vs 0.076 ng/mL），支持其治疗窗设定为>300 pg/mL。

临床前疗效验证
在huPBMCs人源化NSGS小鼠中，单次静脉注射VNX-101（5E12 vg/kg）可完全抑制Raji淋巴瘤生长（p<0.0001），且GP101水平呈剂量依赖性。采用符合EMA标准的卡那霉素抗性质粒生产的载体同样显示显著生存获益（中位生存期77天vs对照组35天）。在播散性白血病模型中，VNX-101联合huPBMCs使Tanoue细胞负荷降至<2%（对照组20%），证实其抗转移潜力。

安全性评估
剂量范围研究发现，雌雄小鼠GP101水平差异达10倍（雄性更高），但最低有效剂量（3E9 vg/kg）仍远超治疗阈值。GLP毒理试验显示无不良反应剂量（NOAEL）>2.7E13 vg/kg，仅见肝细胞包涵体等轻微病变。食蟹猴试验中，2.7E12 vg/kg剂量下ALT短暂升高（134 U/L），但未出现体重减轻等临床异常。

长效抗肿瘤特性
独特的是，在给药340天后接种肿瘤的小鼠中，预先存在的VNX-101仍能显著抑制Razi细胞扩散（p<0.01），证实其持续活性远超现有疗法。

该研究首次证明AAV载体可替代重复给药，实现T细胞衔接器的"工厂化"持续生产。通过创新性分子设计，VNX-101兼具低免疫原性（CpG去除）、高安全性（突变WPRE）和强效表达（CAG启动子）三大特性。尤其值得注意的是，其所需转染肝细胞比例极低（<0.1%），大幅降低肝毒性风险。虽然猴类出现GP101中和抗体，但人类因B细胞清除可能避免该问题——这为治疗自身免疫疾病提供新思路。目前针对复发/难治B细胞恶性肿瘤的I/II期试验（NCT06533579）已启动，若成功将开创"一针治愈"的癌症免疫治疗新模式。