新型MVA-HBVac疫苗载体：通过泛基因型治疗性疫苗接种靶向乙型肝炎病毒的突破性策略

研究人员针对慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染中免疫耐受难题，开发了基于改良痘苗病毒安卡拉（MVA）载体的新型治疗性疫苗MVA-HBVac。该研究通过异源初免-加强策略（TherVacB），结合病毒样颗粒（VLP）初免和MVA-HBVac加强，成功在小鼠模型中诱导了针对HBV S、Core和Pol蛋白的多特异性CD4+/CD8+ T细胞反应，显著降低了血清HBsAg/HBeAg水平和肝内HBV DNA载量。这一泛基因型疫苗设计覆盖全球95%以上流行毒株，为慢性乙肝的功能性治愈提供了临床转化潜力。

　　

慢性乙型肝炎病毒（HBV）感染全球约2.5亿人，每年导致超过100万人死于肝硬化和肝癌。现有核苷类似物治疗虽能抑制病毒复制，但难以清除肝内共价闭合环状DNA（cccDNA），患者需终身服药。更棘手的是，慢性感染者会形成针对HBV的免疫耐受，其特征是病毒特异性T细胞功能衰竭。尽管自发痊愈者通常表现出强烈的多抗原特异性T细胞反应，但既往蛋白类治疗性疫苗临床试验均未能有效打破这种耐受。这一困境促使科学家探索能同时激活B细胞、CD4⁺和CD8⁺ T细胞应答的创新策略。

德国慕尼黑工业大学/亥姆霍兹慕尼黑中心（Technical University of Munich/Helmholtz Munich）的Anna D. Kosinska团队在《Molecular Therapy Nucleic Acids》发表的研究中，开发了名为MVA-HBVac的新型疫苗载体。该载体通过多顺反子设计表达五种HBV蛋白（S、L、Core1-183、Core1-149和Pol RT结构域），覆盖adw（基因型A）、ayw（基因型C/D）等主要血清型。研究采用AAV-HBV小鼠模型模拟人类慢性感染状态，通过异源初免-加强策略（VLP初免+MVA-HBVac加强）成功诱导了跨基因型的免疫应答，使血清HBsAg下降>2 log₁₀，肝内核心蛋白阳性细胞减少90%。

关键技术包括：1）基于同源重组构建MVA-HBVac载体并通过Western blot验证蛋白表达；2）使用AAV-HBV转导建立基因型A/B/D的免疫耐受小鼠模型；3）流式细胞术检测脾脏和肝脏淋巴细胞中IFNγ⁺ CD8⁺ T细胞频率；4）Architect平台定量血清HBsAg/HBeAg及抗-HBs抗体；5）免疫组化分析肝组织核心蛋白表达。

MVA-HBVac载体的设计与表征

通过将优化后的HBV抗原序列（S/adw/gtA、L/ayw/gtC、Core1-183/gtC、Core1-149/gtD及Pol RT共识序列）与P2A/T2A连接，构建了插入MVA缺失位点III的重组载体。Western blot证实感染DF-1细胞后能正确表达糖基化S（24/27 kDa）、L（39/42 kDa）及Core蛋白，且经5代传代后基因组保持稳定（图1C-E）。生长曲线显示MVA-HBVac在哺乳动物HeLa细胞中复制缺陷，符合生物安全要求。

异源免疫策略的免疫原性优势

在naive小鼠中，单独使用MVA-HBVac两次免疫仅诱导中等强度抗-HBs（100 IU/mL）和抗-HBc，而VLP初免联合MVA-HBVac加强可使抗体滴度提升1-2 log₁₀（图2E）。更重要的是，异源策略显著增强了CD8⁺ T细胞反应：针对S、Core的IFNγ⁺CD8⁺ T细胞频率比同源MVA免疫高3-5倍，且诱导出Pol RT特异性应答（图2F）。多因子检测显示约40%的疫苗诱导CD8⁺ T细胞同时分泌IFNγ和TNFα，呈现多功能性（图2G）。

打破慢性感染模型的免疫耐受

在AAV-HBV gtD携带小鼠中，TherVacB方案使血清HBsAg从>10,000 IU/mL降至检测限以下，并伴随短暂的ALT升高（图3C）。肝脏内S特异性CD8⁺ T细胞频率达1.5%，显著高于脾脏（0.3%），证实了效应细胞向靶器官的迁移（图3D）。这种免疫控制持续至加强后15周，肝内HBV DNA减少约90%（图4F）。值得注意的是，虽然naive小鼠能产生Pol RT特异性T细胞，但慢性感染模型仅见S/Core特异性应答，提示免疫耐受的影响存在抗原差异性。

跨基因型有效性验证

针对基因型A/B/D的AAV-HBV模型显示，MVA-HBVac加强后：1）gtB携带者产生独特的Pol RT特异性Granzyme B⁺ CD8⁺ T细胞（图7G）；2）gtA感染小鼠肝内Core特异性T细胞占优势（频率0.8% vs gtD的0.5%）；3）所有基因型均实现血清HBV DNA阴转（图8E）。尽管gtB组的PD-1表达水平最高，但其S特异性T细胞的功能活性未受显著抑制（图7C,E），表明疫苗可克服检查点分子介导的耗竭。

该研究首次证明，通过合理设计的MVA载体表达多基因型HBV抗原，配合Th1型佐剂（c-di-AMP）的VLP初免，能够协同打破慢性感染中的B细胞和T细胞耐受。MVA-HBVac的临床转化价值体现在三方面：1）单载体覆盖主要流行株，简化生产工艺；2）诱导的CD8⁺ T细胞具有肝靶向性和持久性；3）对高抗原负荷的gtD模型仍能实现病毒控制。这些发现为2024年启动的TherVacB临床试验提供了关键理论支撑，也为其他慢性病毒感染的治疗性疫苗设计提供了范式。