烟酰胺N-甲基转移酶（NNMT）通过新生蛋白质组学揭示其在肺癌耐药性中的关键作用及靶向干预策略

这篇研究通过代谢标记和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）技术，首次系统分析了EGFR抑制剂AZD9291处理初期肺癌细胞新生蛋白质组（nascent proteome）的动态变化，发现烟酰胺N-甲基转移酶（NNMT）在耐药性中的核心作用。研究表明，NNMT过表达通过调控Rho GTPases循环、细胞周期相关蛋白及转录因子（如STAT3、MAPK1/3）的磷酸化信号促进耐药，而其抑制剂JBSNF-000088可显著增强药物敏感性。该研究为克服肺癌靶向治疗耐药提供了新靶点和新策略。

　　

引言

表皮生长因子受体（EGFR）突变是肺癌信号网络失调的关键驱动因素，尽管第三代EGFR抑制剂AZD9291在临床上取得显著效果，但耐药性仍是重大挑战。传统蛋白质组学难以捕捉药物刺激初期的关键蛋白扰动，而新生蛋白质组（nascent proteome）分析通过代谢标记技术（如AHA标记）和TAD树脂富集，为揭示早期耐药机制提供了新视角。

研究方法

研究采用H1975肺癌细胞（携带EGFR^L858R/^T790M双突变），通过AHA标记新生蛋白质，结合LC-MS/MS鉴定出2238个蛋白质，其中156个在AZD9291处理24小时后显著变化。平行反应监测（PRM）验证全蛋白质组变化，并利用NNMT过表达（NNMT-OE）和抑制剂JBSNF-000088探讨其功能。磷酸化蛋白质组学进一步分析NNMT对信号通路的影响。

关键发现

1. 新生蛋白质组动态：AZD9291处理24小时后，代谢相关通路（如烟酰胺代谢）显著富集，NNMT合成上调1.8倍（Log₂FC=1.18），且在全蛋白质组中同步升高。

2. NNMT的耐药作用：NNMT-OE细胞对AZD9291敏感性降低，而JBSNF-000088联合治疗可抑制耐药细胞增殖（P<0.001），且耐药细胞中NNMT表达进一步升高。

3. 磷酸化调控网络：NNMT过表达导致236个磷酸化位点上调，涉及转录因子（STAT3 S727、MAPK1/3 T202/Y204）和Rho GTPases循环相关蛋白（如CDC42），促进细胞周期进程和生存信号。

机制探讨

NNMT通过双重机制驱动耐药：

• 表观遗传调控：影响组蛋白甲基化，上调干细胞标志物（SOX2、NANOG）。

• 磷酸化重编程：激活STAT3下游靶基因（如Bcl-2、c-Myc），抑制凋亡并促进细胞迁移。

临床意义

该研究首次将新生蛋白质组学应用于 kinase 抑制剂耐药研究，提出NNMT作为克服肺癌耐药的潜在靶点，其抑制剂JBSNF-000088或可成为联合治疗的新选择。

技术亮点

• TAD树脂富集：高效分离新生蛋白质，降低背景干扰。

• 多组学整合：结合磷酸化蛋白质组揭示NNMT的全局调控网络。

（注：全文数据均源自原文图表及统计分析，无主观推断内容。）