TP-0903通过抑制Aurora A-PLK1信号通路及激活非典型铁死亡途径抑制骨髓增生异常综合征细胞增殖的机制研究

本文推荐：TP-0903作为多靶点激酶抑制剂，通过抑制Aurora A-PLK1轴诱导G2/M期阻滞，同时激活TGF-β1/SMAD3介导的铁死亡（ferroptosis），显著抑制骨髓增生异常综合征（MDS）细胞增殖。研究揭示其双重作用机制：一方面通过破坏AXL-MET互作抑制PI3K/AKT/mTOR通路，另一方面通过上调HMOX1和转铁蛋白引发活性氧（ROS）累积，为耐药性血液肿瘤提供创新治疗策略。

　　

TP-0903抑制Aurora A-PLK1信号通路与铁死亡激活的协同抗肿瘤机制

ABSTRACT

低分子化合物TP-0903最初作为AXL抑制剂开发，近期研究发现其对慢性淋巴细胞白血病（CLL）、实体瘤和耐药性急性髓系白血病（AML）具有显著疗效。本研究聚焦TP-0903在骨髓增生异常综合征（MDS）衍生细胞系MDS-L中的作用机制，发现其通过双重途径抑制肿瘤生长：一是抑制Aurora A-PLK1信号轴导致有丝分裂障碍，二是激活非经典铁死亡途径。

1 Introduction

MDS作为造血干细胞（HSC）恶性疾病，高风险患者依赖造血干细胞移植（HSCT）或DNA甲基转移酶抑制剂（DNMTis）治疗，但疗效有限。TP-0903靶向AXL、Aurora A、JAK2等多重激酶，前期研究证实其对CLL和胰腺癌有效，但MDS中的作用机制尚未阐明。MDS-L细胞系源自del(5q)患者，是研究MDS分子机制的理想模型。

2 Materials and Methods

实验采用MDS-L、HL-60和K562细胞系，通过MTT法检测细胞活力，流式细胞术分析凋亡（Annexin V/PI染色）和细胞周期（PI染色）。Western blot检测AXL、p-AKT、γH2AX等蛋白表达，免疫荧光观察Aurora A定位，RNA测序分析差异基因。铁死亡通过FerroOrange染色和ROS检测验证。

3 Results

3.1 凋亡诱导与PI3K/AKT/mTOR通路抑制

TP-0903对MDS-L、HL-60和K562的IC₅₀分别为35.9 nM、23.8 nM和130 nM。凋亡标志物cleaved PARP显著增加，且正常CD34⁺细胞仅在25-50 nM时出现凋亡，显示肿瘤细胞敏感性更高。TP-0903抑制AKT磷酸化，下调RPS6和EIF4EBP1表达，提示PI3K/AKT/mTOR通路被阻断。

3.2 AXL-MET互作破坏

邻近连接实验（PLA）显示TP-0903显著减少AXL与磷酸化MET的结合（p<0.01），但共定位实验未发现变化，表明药物可能通过空间位阻破坏信号复合物形成。

3.3 G₂/M期阻滞与DNA损伤应答

细胞周期分析显示G₂/M期细胞比例增加，γH2AX焦点积累提示DNA损伤激活。MDS-L中TGF-β1/SMAD3信号上调，Cyclin A2/CDK1复合物减少；HL-60依赖CDKN1A上调；K562则呈现独特的核环状畸形，与TPX2过表达相关。

3.4 Aurora A-PLK1轴调控异常

TP-0903使MDS-L中Aurora A磷酸化降低70%，导致BORA降解和PLK1活性抑制。shAXL细胞中Aurora A定位紊乱，中心体成熟受阻。选择性抑制剂MLN8237验证了Aurora A特异性抑制作用。

3.5 铁死亡激活

RNA测序显示MDS-L中铁死亡相关基因HMOX1、FTH1上调，伴随ROS和Fe²⁺累积。铁死亡抑制剂Ferrostatin-1可挽救TP-0903导致的细胞死亡（p<0.001），证实该途径的关键作用。

4 Discussion

TP-0903通过三方面发挥抗肿瘤效应：

1）激酶抑制：靶向AXL-MET互作和Aurora A-PLK1轴，破坏有丝分裂；

2）代谢重编程：TGF-β1/SMAD3驱动HMOX1依赖的铁死亡；

3）细胞特异性响应：MDS-L以铁死亡为主，HL-60依赖凋亡，K562呈现TPX2介导的核异常。

该研究为TP-0903治疗难治性血液肿瘤提供了理论依据，尤其针对DNMTis耐药或HSCT不适配患者。未来需进一步探索其临床转化潜力及与其他靶向药物的协同作用。