PTRF通过上调EGFR介导黑色素瘤获得性耐药机制的研究

本研究揭示了PTRF（cavin-1）通过上调EGFR表达促进黑色素瘤对BRAF抑制剂（BRAFi）及BRAFi+MEK抑制剂（MEKi）联合治疗的获得性耐药机制。通过电镜、RNA测序和功能实验证实，耐药细胞中窖窝（caveolae）数量增加，PTRF通过激活PI3K/AKT、MAPK等EGFR下游通路增强肿瘤存活能力，为靶向窖窝联合治疗提供新策略。

　　

1 引言

黑色素瘤作为最恶性的皮肤肿瘤，约50%病例存在BRAF突变。尽管BRAFi及其与MEKi的联合疗法显著改善患者预后，但耐药性不可避免。窖窝作为质膜内陷结构，通过PTRF和caveolin-1等关键组分调控信号转导。既往研究表明，EGFR通路激活与黑色素瘤耐药相关，但其与窖窝的关联机制尚未阐明。

2 结果

2.1 PTRF表达与窖窝数量增加驱动耐药

耐药细胞（BR/BRAFi耐药；CR/BRAFi+MEKi耐药）中PTRF和caveolin-1表达显著上调，电镜显示窖窝数量增加。临床样本中，4/6治疗后肿瘤活检显示PTRF表达升高，提示窖窝参与耐药形成。

2.2 PTRF维持耐药细胞存活

敲除PTRF或caveolin-1可抑制耐药细胞增殖并促进凋亡（Ki-67染色减少，凋亡率增加）。小鼠移植瘤实验中，shPTRF组肿瘤生长显著受抑，证实窖窝是耐药细胞存活的必要条件。

2.3 PTRF是获得性耐药的关键

低表达PTRF的敏感细胞WM989经长期BRAFi处理可诱导PTRF上调并形成耐药克隆；而PTRF过表达使敏感细胞获得对BRAFi和BRAFi+MEKi的耐药性。

2.4 EGFR通路介导PTRF的耐药效应

RNA-seq显示PTRF过表达激活PI3K/AKT、MAPK等EGFR下游通路。耐药细胞中EGFR与PTRF/caveolin-1同步上调，且EGFR敲除可逆转PTRF诱导的耐药表型。

3 讨论

窖窝通过调控EGFR表达及下游信号网络（如PI3K/AKT）促进耐药。PTRF还可能通过影响药物外排或衰老相关机制增强耐药性。本研究首次揭示PTRF-EGFR轴在黑色素瘤耐药中的作用，为联合靶向窖窝的治疗策略提供理论依据。

4 材料与方法

实验采用WM989、1205Lu等细胞系，通过慢病毒转染构建基因修饰模型。耐药细胞持续暴露于PLX-4720（BRAFi）或联合PD0325901（MEKi）。功能分析包括电镜、免疫荧光、流式细胞术和小鼠移植瘤实验。RNA-seq数据经KEGG通路富集分析，统计学处理采用GraphPad Prism 8。