头发中乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）的10年稳定性研究：基于909例样本的回顾性LC-MS/MS分析为法医毒理学提供长期酒精监测新证据

（编辑推荐）本研究通过LC-MS/MS技术对909例储存10年的头发样本进行回顾性分析，首次证实乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）在室温避光条件下浓度保持稳定（>80%样本符合测量不确定度），仅4.4%样本降至慢性饮酒阈值（30 pg/mg）以下，为法医鉴定、死后评估及流行病学研究提供了可靠的长期酒精代谢标志物。

　　

ABSTRACT

监测长期酒精摄入对法医和公共卫生至关重要。头发中乙醇直接代谢物乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）已成为检测慢性饮酒的金标准。虽然短期分析可靠性已确立，但长达10年的储存稳定性尚未系统评估。本研究通过重新检测2013-2022年间909例样本发现，EtG浓度无显著降解，80%以上样本在考虑分析不确定度后结果匹配，仅4.4%样本在10年后低于慢性饮酒阈值（30 pg/mg），证实头发EtG在标准储存条件下可稳定存在十年。

1 引言

慢性饮酒检测在司法（如酒驾鉴定、儿童监护权）和临床（肝移植评估、酒精使用障碍筛查）中具有关键作用。EtG作为非氧化性亲水代谢物，仅0.1%-0.2%乙醇通过UDP-葡萄糖醛酸转移酶（UGT）转化为EtG。既往研究多关注短期稳定性或加速老化实验（4-60°C下24个月），缺乏真实长期储存数据。

2 材料与方法

2.1 试剂

采用Sigma Aldrich提供的EtG及氘代内标（EtG-d₅），流动相为0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B）。

2.2 样本

收集909例近6 cm枕部头发（2013-2022年），室温避光保存。另取10例戒酒者头发制备空白对照。

2.3 分析流程

采用经DIN EN ISO/IEC 17025认证的LC-MS/MS方法：样本经二氯甲烷/甲醇洗涤后超声提取，Luna Omega Polar C18柱分离，负离子模式检测（LOD=2 pg/mg，LOQ=6.7 pg/mg）。64次外部能力验证（PT）中仅2次Z值超±2。

2.4 实验设计

将原始检测值（T0≥15 pg/mg）与2023年复测值对比，按储存年限分组。稳定性判定标准为两次结果差异小于测量不确定度（y=0.1732x+0.1157）。

3 结果

3.1 浓度变化

除2013、2019、2022年组（p<0.01）外，其余年份复测浓度无统计学差异（表1）。中位数浓度波动范围稳定（表2），如2014年从52 pg/mg变为55 pg/mg。

3.2 匹配率

考虑测量不确定度后，78.9%±6.8%样本结果匹配（表3）。2013年组匹配率最低（67.4%），可能与早期方法学差异有关（表S1）。

3.3 阈值分析

仅40例（4.4%）储存10年后低于30 pg/mg阈值，假阴性率可控。

4 讨论

头发作为生物惰性基质，其低酶活性使EtG能长期稳定存在。与Ammann的加速老化实验及Duda的36个月研究相比，本研究首次证实十年尺度稳定性。2013年组异常可能与锁状结构错位或采集部位差异有关，但无化学降解证据。

5 结论

EtG在头发中的十年稳定性验证了存档样本在死后调查、历史饮酒分析中的可靠性，为法医和流行病学研究拓展了时间维度。未来可探索其他生物标志物的长期稳定性模式。