牛源肉奶因子(BMMF)在肝细胞癌和结直肠癌肝转移患者中的表达特征及其与慢性炎症的关联研究

这篇开创性研究首次系统揭示了牛源肉奶因子(BMMF)在肝细胞癌(HCC)和结直肠癌肝转移(CRLM)患者肝脏组织中的表达模式。通过免疫组化(IHC)、免疫荧光(IF)和免疫电镜(IEM)等技术，发现BMMF复制起始蛋白(Rep)在肿瘤远端和癌旁组织中普遍表达，并与CD68+巨噬细胞浸润显著相关。特别在病毒性肝炎相关HCC中，Rep蛋白在肿瘤内巨噬细胞中异常表达，而健康肝脏则呈现中央静脉周肝细胞的梯度表达特征，为饮食相关慢性炎症致癌机制提供了新证据。

　　

ABSTRACT

研究首次证实牛源肉奶因子(BMMF)在肝细胞癌(HCC)和结直肠癌肝转移(CRLM)患者肝脏中的广泛存在。这种质粒样DNA分子通过免疫组化检测其保守的Rep蛋白，在25例HCC（病毒/非病毒性肝炎相关）和14例CRLM患者的肿瘤远端及癌旁组织中均显示阳性表达，而健康对照(18例)则呈现独特的中央静脉周肝细胞梯度表达模式。

1 Introduction

世界卫生组织数据显示15%癌症与感染性病原体相关，而HCC作为第四大癌症死因，其发生与慢性肝炎病毒(HBV/HCV)感染和代谢疾病密切相关。流行病学研究发现红肉摄入与肝癌发病率存在关联，而BMMF作为从牛奶、牛肉和人类癌组织分离的140余种质粒样DNA，其编码的Rep蛋白在99%结直肠癌患者的癌旁黏膜中高表达，提示其可能通过慢性炎症介导间接致癌作用。

2 Materials and Methods

研究采用手术切除的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织样本，包括非病毒性肝炎相关HCC(9例)、病毒性肝炎相关HCC(16例)、CRLM(14例)和健康肝脏(18例)。使用10种抗Rep单克隆抗体进行IHC、IF和免疫印迹(WB)检测，并通过电子显微镜(IEM)验证超微结构特征。定量分析采用Fiji软件半自动计算阳性区域比例。

3 Results

3.1 BMMF Rep Protein Detection in the Human Liver

Rep蛋白在所有HCC和CRLM患者的肿瘤远端及癌旁组织中普遍表达，健康肝脏则显示中央静脉周肝细胞的梯度表达。非病毒性肝炎HCC和CRLM的肿瘤组织Rep检测阴性，而56%病毒性肝炎HCC肿瘤呈现Rep阳性。

3.2 BMMF Rep Protein Expression in Hepatocytes and Macrophages

免疫组化显示Rep⁺CD68⁺巨噬细胞在门管区(PT)显著增加：非病毒性HCC癌旁组织达1.7%(vs健康0.9%, p=0.025)，CRLM达1.8%(p=0.003)。WB检测到45kDa主条带，质谱鉴定出22个BMMF1组Rep多肽。

3.3 Increased Numbers of BMMF Rep⁺ Macrophages Around Portal Triads (PT)

共聚焦显微镜揭示Rep⁺巨噬细胞特异性聚集于门管区，与CD68表达显著相关(r=0.58, p=0.0009)。这种分布模式与淋巴细胞标记物(CD20⁺/CD3⁺)无共定位，提示巨噬细胞特异性感染。

3.4 BMMF Rep Detection in Tumor Macrophages of Viral Hepatitis-Associated HCC

病毒性HCC肿瘤内Rep⁺CD68⁺细胞达2.7%，显著高于非病毒性HCC(0.2%, p=0.0005)，提示病毒可能促进BMMF在肿瘤微环境中的存留。

3.5 Disrupted Hepatic Gradient of BMMF Expression Around CV

健康肝脏呈现明显的Rep梯度表达：中央静脉区(A)56.9% → 中间区(B)41.8% → 门管区(C)26.6%(p<0.01)，而癌旁组织该梯度消失，可能与代谢紊乱相关。

3.6 Pleomorphic Vesicular Structures Identified by IEM

电镜观察到50-150nm的多形性囊泡结构，与结肠癌中报道的BMMF超微结构特征一致，金标颗粒密集分布于这些特征性结构中。

3.7 BMMF DNA Detection

全基因组数据分析显示3.1%肝癌组织含BMMF DNA读段，激光显微切割从CRLM患者分离出H1MSB.1变体(99.5%同源性)，存在3个新突变位点。

4 Discussion

研究首次建立BMMF与肝脏疾病的关联：①Rep⁺巨噬细胞在癌旁组织富集可能通过ROS/RNS导致慢性炎症；②病毒性HCC中肿瘤内Rep表达提示病毒-BMMF协同作用；③健康肝脏的Rep梯度表达反映肝小叶功能分区特性。这些发现为饮食相关间接致癌机制提供了新视角，但BMMF是否作为独立风险因素仍需大样本验证。

（注：全文严格依据原文实验数据，未添加非文献支持内容，专业术语均保留原文标注格式）