对流聚合酶链式反应(CPCR)联合核酸侧流免疫层析技术(NALF)快速检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌的研究

本研究创新性地将对流PCR(CPCR)技术与核酸侧流免疫层析(NALF1)相结合，建立了一种能在25小时内快速检测猪肉中单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)的方法。该方法特异性强(仅对目标菌株扩增)、灵敏度高(检测限达1.5×104 CFU)，相比传统ISO 11290标准方法(耗时1周)显著提升检测效率，为食品安全监测提供了便携高效的解决方案。

　　

Highlight部分专业翻译：

【菌株与培养条件】

实验采用单核细胞增生李斯特菌(L. monocytogenes)ATCC 7644作为阳性对照，同时选用无害李斯特菌(L. innocua)、伊氏李斯特菌(L. ivanovii)、大肠杆菌(E. coli)O157:H7等7种常见食源性病原体作为阴性对照。所有菌株在-70°C保存，检测前使用胰蛋白酶大豆琼脂(TSA)进行活化培养。

【单核细胞增生李斯特菌检测】

CPCR技术成功扩增出目标菌株特异性片段，NALF1检测卡呈现清晰红色条带(图1)。凝胶电泳显示仅L. monocytogenes基因组DNA产生明显条带(图1A)，与其他病原体无交叉反应。该技术对人工污染猪肉样本的检测限达1.5×10⁴ CFU(约600个细胞/克)。

【结论】

本研究创新性地将ISO11290标准的前增菌步骤与CPCR/NALF1技术联用，将检测时间从传统方法的7天缩短至25小时，其中分子检测环节仅需50分钟。该方法在60份市售猪肉样本中检出5份阳性(8.3%)，证实其具有快速、特异、便携等优势，特别适合食品安全现场监测。