抗蛇毒血清对分类重组后的E. ocellatus与E. romani蛇毒中和效力的临床前评估

本文通过体外实验和小鼠模型，系统评估了三种抗蛇毒血清（EchiTAbG、SAIMR Echis和Echiven）对西非新分类的两种锯鳞蝰（E. ocellatus sensu stricto与E. romani）蛇毒的交叉中和能力。研究发现，尽管蛇毒磷脂酶A2（PLA2）和金属蛋白酶（SVMP）活性存在种间差异，但所有抗蛇毒血清均能识别并中和不同地理来源的蛇毒，其中SAIMR Echis在体内外实验中表现最优。该研究为抗蛇毒血清的临床应用提供了重要数据支持。

　　

3.1 基于线粒体条形码的蛇种鉴定

通过测序分析40条来自尼日利亚东北部的锯鳞蝰皮肤样本的CYTB和NADH4基因，证实这些曾被归类为E. ocellatus sensu lato的蛇实际均为新分类的E. romani。同时发现商业蛇毒供应商Latoxan提供的喀麦隆来源"E. ocellatus"实为E. romani，而加纳样本确认为E. ocellatus sensu stricto。这一发现解释了为何部分抗蛇毒血清（如EchiTAbG）实际是以E. romani蛇毒制备。

3.2 抗蛇毒血清的体外结合特性

ELISA实验显示，三种抗蛇毒血清对E. ocellatus（加纳）、E. romani（尼日利亚）和E. romani（喀麦隆）蛇毒均表现出高度结合能力，稀释至1:62,500时仍保持显著结合。其中EchiTAbG的识别效价略高，但可能与使用的二抗差异有关。

3.3 蛇毒酶活性差异与中和效果

磷脂酶A₂活性检测显示：E. ocellatus（加纳）活性最强（3.25 U/mL/μg），E. romani（喀麦隆）次之（1.75 U/mL/μg），而E. romani（尼日利亚）几乎无活性。在最高剂量下，所有抗蛇毒血清均可显著中和PLA₂活性，但对喀麦隆样本，SAIMR Echis在低剂量（0.78 μL）时中和效果显著优于其他两种。

金属蛋白酶（SVMP）活性分析表明：E. ocellatus（加纳）与E. romani（尼日利亚）活性相当，均显著高于E. romani（喀麦隆）。2.5 μL抗蛇毒血清可使SVMP活性降低≥30%，其中EchiTAbG对尼日利亚样本的中和效果最稳定。

血浆凝固实验发现三地蛇毒均能显著诱导凝血（p<0.0001），但活性无统计学差异。SAIMR Echis和Echiven在低剂量（0.313 μL）时对尼日利亚样本的凝血抑制效果显著优于EchiTAbG（<50% vs 70-90%剩余活性）。

3.6 体内中和效力比较

小鼠致死性实验中，SAIMR Echis对尼日利亚E. romani的中和效能最强（ED₅₀ 25 μL），分别是Echiven（2倍）和EchiTAbG（7倍）的效能。当使用固定剂量（尼日利亚样本的100%保护剂量）测试时：

• 对抗喀麦隆E. romani：仅SAIMR Echis实现80%存活率，Echiven和EchiTAbG分别仅40%和20%
• 对抗加纳E. ocellatus：SAIMR Echis和Echiven实现100%保护，而EchiTAbG未能阻止死亡（平均存活时间95分钟）

讨论

该研究首次系统比较了新分类的E. ocellatus与E. romani蛇毒生物活性差异及现有抗蛇毒血清的中和效果。尽管所有测试血清都表现出交叉中和能力，但SAIMR Echis在多项指标中表现突出。值得注意的是，地理差异导致的E. romani蛇毒变异可能影响治疗效果，如喀麦隆样本的中和难度显著高于尼日利亚样本。这些发现为WHO降低蛇咬伤死亡率的战略提供了重要 preclinical 证据，同时提示需要进一步开展针对不同地理种群的临床研究。