多重逆转录-多交叉置换扩增-侧流层析技术同步检测甲型流感病毒H1N1、H3N2及H7N9亚型

本文推荐一种创新性检测技术——多重逆转录-多交叉置换扩增-侧流层析技术（IAVs-mRT-MCDA-LFB），可在63°C恒温条件下40分钟内同步扩增甲型流感病毒（IAVs）的HA/NA基因，并通过双通道侧流层析试纸条（LFB）实现可视化判读。该技术较传统RT-PCR灵敏度更高，且无交叉反应，为H1N1、H3N2及高致死率H7N9亚型的快速诊断提供了简便、经济且高效的分子检测方案。

　　

Highlight

近年来，H1N1和H3N2已成为季节性流感主要流行株（Kumar, 2017; Gavigan, 2019），而2013年首次报道的H7N9禽源病毒因其40%的高致死率持续威胁公共卫生（Lancet Infectious, 2013; Ke et al., 2017）。目前，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）仍是IAVs分型的金标准，但其依赖昂贵设备和复杂操作流程。

Discussion

本研究开发的IAVs-mRT-MCDA-LFB技术通过单反应体系同步逆转录并扩增HA/NA基因，在63°C恒温条件下仅需40分钟即可完成，结合侧流层析试纸条（LFB）实现双靶标可视化检测。相较于RT-PCR，该方法展现出更高灵敏度（可检测低至10² copies/μL的病毒RNA），且与样本中其他病原体基因无交叉反应。其"样本进-结果出"的全流程可在1小时内完成，显著优于传统方法的4-6小时。

Conclusion

IAVs-mRT-MCDA-LFB技术成功应用于模拟临床样本中H1N1、H3N2和H7N9的检测，其"一管式"恒温扩增设计摆脱了对精密仪器的依赖，兼具操作简便性（仅需水浴锅）、高特异性（靶向HA/NA保守区）和成本优势（试剂成本降低60%）。该技术为流感大流行防控提供了极具转化潜力的现场快速诊断工具。