美国西南部流行区收容犬中狼旋尾线虫感染率调查及新型qPCR检测方法的优化与应用

本研究针对人畜共患寄生虫狼旋尾线虫(Onchocerca lupi)的诊断难题，开发了一种灵敏度达0.33 pg的TaqMan探针qPCR检测技术，并在美国新墨西哥州阿尔伯克基市的404只收容犬中开展流行病学调查。研究发现犬群感染率为1.9%，首次证实城市环境中存在O. lupi传播，为这一人兽共患病的防控提供了重要分子工具和流行病学数据。

　　

在美洲西南部的荒漠地带，一种名为狼旋尾线虫(O. lupi)的神秘寄生虫正悄然威胁着人类和动物的健康。这种能引发眼部结节和结膜炎的丝状寄生虫，已在全球四大洲的犬科动物中发现，更令人担忧的是它的人畜共患特性——2013年首例人类感染报道后，美国西南部陆续出现多例儿童神经系统感染病例。然而，由于缺乏敏感特异的诊断方法，这种寄生虫的真实流行状况始终笼罩在迷雾中，非临床感染犬更成为潜在的传播"沉默库"。

来自得克萨斯农工大学兽医与生物医学科学学院的研究团队决心揭开这一谜团。他们注意到传统皮肤活检镜检法灵敏度不足，而现有PCR方法存在交叉反应风险。通过对美国流行株cox1基因序列的深入分析，团队优化了引物设计，将原引物5'-GGAGGCGGTCCTGGTAGTAG-3'的T→C突变显著提高了检测特异性。这项发表于《Parasites》的研究，不仅建立了检测限达0.33 pg的qPCR方法，更首次系统调查了城市收容犬群的感染状况。

研究采用三阶段技术路线：首先通过动态范围测试确定1:5为最佳DNA稀释比例，并验证4000拷贝/μL的内参浓度；随后对阿尔伯克基动物收容所404只犬的808份肩胛间皮肤样本进行检测；最后通过cox1基因测序确认结果。关键技术突破在于引入VetMAX Xeno内参系统，有效识别了78.9%样本中存在的PCR抑制现象。

【qPCR优化与验证】

标准曲线显示该qPCR在6个数量级范围内保持优异线性(R²=99.2%)，效率达89%。动态测试证实1:5稀释可有效消除皮肤样本抑制效应，而交叉实验显示与犬常见丝虫D. immitis、A. reconditum和C. bainae无交叉反应。

【流行病学研究】

在404只收容犬(29.7%幼犬，64.3%成犬)中，qPCR检出率(1.9%)显著高于常规PCR(1.2%)。值得注意的是，2例阳性幼犬(≤1岁)的发现挑战了该虫12-18个月潜伏期的传统认知。20例C. bainae阳性样本的检出，既验证了方法的特异性，也首次证实该寄生虫在美国犬群中的存在。

【风险因素分析】

统计学分析显示，年龄(P=0.704)、性别(P=0.910)、AKC品种组(P=0.217)和毛色(P=0.781)均与感染风险无显著关联。但运动犬组11.1%的阳性率值得关注，这可能与其户外活动特性相关。

这项研究具有三重里程碑意义：其一，建立的qPCR方法将检测灵敏度提升三个数量级，为临床诊断和流行病学研究提供利器；其二，首次揭示城市环境中O. lupi的传播链，改变了该病仅存在于农村的认知；其三，幼犬阳性样本暗示寄生虫潜伏期可能短于预期，这对制定防控策略具有重要指导价值。研究者特别指出，1.9%的检出率可能被低估——由于皮肤微丝蚴分布不均特性，实际感染率可能更高。随着气候变暖可能扩大媒介昆虫的分布范围，这项研究为监测这种人兽共患病的传播风险提供了科学基线。