G4-NASBA：一种超快速、高灵敏度便携式甲型流感病毒等温检测系统的研发与应用

本文推荐一种创新性的甲型流感病毒(IAV)检测系统G4-NASBA，通过整合核酸序列依赖性扩增(NASBA)技术与G-四链体-硫堇T(G4-ThT)荧光传感器，实现15分钟内3拷贝/μL的超敏检测。该系统与RT-qPCR相比具有94%的一致性，满足WHO的ASSURED标准，为呼吸道感染病毒(URTIs)的即时检测(POCT)提供了高效解决方案。

　　

亮点

G4-ThT传感器验证

不同G-四链体(G4)RNA与硫堇T(ThT)孵育后，在450nm激发光下均于490nm处产生最强荧光（图2a-b）。结果表明，在K⁺存在时，正确折叠的G4 RNA能与ThT分子相互作用，显著增强荧光信号，证实G4-ThT复合物是高效的核酸荧光传感器。

NASBA扩增与荧光检测

三组引物中，针对IAV M1基因的引物组展现出最优扩增效率。该系统可在15分钟内检测低至3拷贝/μL的病毒RNA，且不受其他病毒RNA干扰。

讨论

甲型流感病毒(IAV)每年导致全球29-65万呼吸道疾病死亡。本研究开发的G4-NASBA系统兼具超快速（<15分钟）、高灵敏（3拷贝/μL）和便携特性，其免标记检测模式特别适合资源有限地区的POCT应用。

结论

该研究成功构建了整合NASBA与G4-ThT传感器的病毒检测系统，其简单步骤和高鲁棒性非常适用于上呼吸道感染病毒(URTIs)的RNA检测。未来通过整合核酸提取系统和其他荧光适配体，有望实现全自动多通道POCT检测。